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논문 기본 정보

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저널정보
한국생명과학회 생명과학회지 생명과학회지 제15권 제2호
발행연도
2005.4
수록면
253 - 260 (8page)

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인체 MCAK 단백질을 Escherichia. coli에서 재조합 단백질로 발현하였다. 이를 SDS-PAGE 후 electroelution으로 정제하고 항원으로 사용하여 rat에서 다클론성 항체생성을 유도한 결과, 생성된 항체는 Western blot analysis에 의해 인체 MCAK 단백질 (81 kDa)을 특이적으로 인식할 수 있었으며, Jurkat T cells과 293T cells에 있어서 MCAK 단백질의 대부분이 핵 내에 위치함을 확인할 수 있었다. 세포주기에 따른 MCAK 단백질의 발현양의 변화를 조사하기 위해, Jurkat T cells을 Hydroxy urea 또는 Nocodazole의 처리로 G₁/S boundary 그리고 G₂/M boundary에 blocking하고 이로부터 release 시키는 시간을 달리하여 다양한 세포주기상에 위치한 Jurkat T cells을 확보하였다. 각각의 Jurkat T cells로부터 cell lysate를 얻어서 Western blot analysis를 시도한 결과, MCAK 발현양은 S phase에서 가장 높았으며 MCAK의 SDS-PAGE상의 mobility가 81 kDa에서 84 kDa로 shift 됨을 확인 하였다. MCAK의 전기영동상의 mobility shift에 의한 slow moving p84^(HsMCAK)는 S phase 후반부터 나타나기 시작하며 G₂/M phase에 최대였고 G₁phase에서는 확인되지 않았다. 이는 세포주기에 따라 MCAK의 단백질의 인산화 양상이 달라짐을 시사한다. 생성된 항체를 이용한 Immunocytochemical analysis의 결과, 인체 MCAK 단백질은 세포주기의 interphase에서는 주로 중심체와 핵에 존재하며, M phase의 각 단계에 따라서 spindle pole, centromere, spindle fiber 또는 midbody에 존재함을 확인하였다. 이러한 연구 결과는 E. coli에서 발현된 재조합 HsMCAK 단백질을 항원으로 하여 rat에서 생산한 다클론성 항체가 HsMCAK 단백질을 특이적으로 인식할 수 있음과 또한 HsMCAK 단백질의 인산화를 나타내는 SDS-PAGE상의 mobility-shift가 G₂-M phase에 최대에 도달하는 양상으로 세포주기에 따라 변동됨을 나타내며, HsMCAK의 인산화와 HsMCAK의 세포 내 위치간의 관련성을 시사한다. 아울러 이러한 연구결과는 hamster 및 Xenopus 등에서 주로 연구되고 있는 MCAK의 세포주기상의 주요기능이 인체세포에도 적용될 수 있음을 시사한다.

목차

Abstract

MATERIALS AND METHODS

RESULTS AND DISCUSSION

Acknowledgements

References

초록

참고문헌 (25)

참고문헌 신청
Adams, R. L. and J. G. Lindsay. 1967. Hydroxyurea: reversal of inhibition and use as a cell-synchronizing agent. J. Biol. Chem. 242, 1314-1317. google schola Andrews, P. D., Y. Ovechkina, N. Morrice, M. Wagenbach, K. Duncan, L. Wordeman and J. R. Swedlow. 2004. Aurora B regulates MCAK at the mitotic centromere. Dev. Cell 6, 253-268. google schola Bairoch, A., P. Bucher and K. Hofmann. 1996. The PROSITE database, its status in 1995. Nucleic Acids Res. 24, 189-196 google schola Bloom, G. S. and S. A. Endow. 1995. Motor proteins 1: kinesins. Protein Prof. 2, 1109-1171. google schola Brady, S. T. 1995. Biochemical and functional diversity of microtubule motors in the nervous system. Trends Cell Biol. 5, 159-164. google schola

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