배양 중 심장근육세포와 심장근육모세포주 H9c2세포의 세포사이결합의 형성

박정현; 강한솔; 박민철; 김대중; 한장희; 성훈기; 김주영; 송인환; 성언기; 이융창

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자료유형: 학술저널

저자정보: 박정현 강한솔 박민철 김대중 한장희 성훈기 김주영 송인환 성언기 이융창

저널정보: 대한체질인류학회 해부·생물인류학 대한체질인류학회지 제16권 제3호

발행연도: 2003.9

수록면: 165 - 175 (11page)

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간추림 허형성 심장정판에 대한 세포이식의 시험관내 모델을 개발하기 위하여 신생 흰쥐에서 심장근육세포를 직접 분리하여 배양한 후 심장근육모세포주인 H9c2 세포와 혼합배양하였다. 각각 기능적으로 세포의 동시박동(synchronous beating) 이 일어나는지와 그와 밀정한 관련이 있는 구조적인 장치인 세포사이결합의 형성 및 세포를 격단액과의 상관관계를 분석함으로써 심장재생과 관련된 심장근육모세포의 분화과정을 규명하고자 하였다. 배양 과정에서 심장근육세포와 정하고 있는 H9c2 세포는 증식이 거의 일어나지 않았다 심장근육세포들은 동시수축을 하였지만 H9c2 세포와 접하고 있는 심장근육세포의 경우 그 수축력과 빈도가 감소되는 것을 알 수 있었다 심장근육세포와 접하고 있는 H9c2 세포는 심장근육세포의 수축에 따라 피동적인 움직임만 관찰되었고 자체의 수축은 일 어나가 않았다. 성장큰육세포와 H9c2 의 세포막이 정하고 있는 부위에서의 F-actin 의 분포는 각각의 세포를 단독 배양한 경우보다 감소하였다 또한 세 종류의 세포사이결합들도 모두 그 부위에서는 뚜렷한 반응을 보이지 않는 반면 인접한 성장근육세포들 사이에는 여전히 뚜렷한 세포사이결합을 행성하고 있었다. H9c2 와 생하고 있는 심장근육세포 모두에서 가는근육미세성유의 분포가 감소하였다. 또한 교통반정, 부착판, 부착반정 풍 세 종류의 세포 사이결합도 관찰되지 않았다 따라서 온 실험 결과를 통하여 심장근육오세포주인 H9c2 논 심장근육세포와 혼합배 양을 통하여 분화가 유도되지 않았고 심장근육세포와의 세포사이결합도 형성되지 않았다. 향후 분화와 관련된 천사인자들 (Nkx2-5, GATA4, Tbx5, Tbx12, dHand 등) 과 세포사이결합에 관련된 인자들의 발현을 조절하여 심장근육세포들의 분화를 유도하는 시도가 있어야 할 것이다. 본 실험은 다양한 심장질환에 대한 획기적인 치료방법으로 대두되고 있는 세포이식에 대한 기초자료로 향후 진행된 세포이식의 실험모델을 구축하는 데 바탕이 될 것으 로 사료된다.

Recently, new treatments for human heart disease such as ischemia infaiction, cardiomyopathy, coionary heart disease have been developed transplantation various kinds of cells from skeletal muscle, endothelium, mesenchyme, hemopoietic tissue to injured area after infarction were challenged It's so called 'Cell Transplantation' This therapeutic strategy already adopted and got a good result in clinical trial But several limitations are still remained, including ethics donor cell numbers, side effects therapeutic efficiency
In this research we investigated the formation of intercellular Junction and synchronous contraction between cardiomyocyte and H9c2 cell line in co-culture to establish experimental model in Vitro for cell transplantation For this purpose, two kinds of cells, primary cultured cardiomyocyte and H9c2 (cardiomyoblast cell line) were used
Cultured cardiomyocytes had repetitive contraction-relaxation pattern along longitudinal axis both in single and co-culture But their contractions were slower less regular, less strong in co-culture than in cardiomyocyte culture only
H9c2 cells did not contracted actively themselves, but moved toward caldiomyocyte passively coincided with contraction In contact region between two kinds of cells there was no signal after immunocytochemical staining labeled With connexin43 (gap Junction), desmoplakin(desmosome), N-cadherin (adherent Junction) even though they had membrane contact Moreover F-actin and striation were less developed
These lesults suggested that co-culture system Interfere with remodelling of contractile apparatus intercellular Junction formation as well as contraction -relaxation Furthermore cardiomyocyte could not Induce H9c2 cells differentiation in to cardiomyocyte Therefore, much more research would be essential for clinical application of cell transplantation and this study would be the basic source for further study of new therapy of myocardial disease and building up in vitro model

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