목차

Ⅰ. 서론 1
Ⅱ. 연구사 5
Ⅲ. 재료 및 방법 8
1. 안면도 정금나무 군락 식생조사 8
가. 조사지 개황 8
나. 식생조사 9
다. 토양조사 10
라. 통계분석 10
2. 정금나무 열매 70% 아세톤 추출물의 생리활성 12
가. 시약 및 기기 12
1) 시약 12
2) 기기 12
나. 실험재료 13
다. 추출물 제조 13
라. 항산화 활성 13
1) 총 폴리페놀 함량 측정 13
2) 전자공여능 측정 13
3) ABTS+ radical 소거능 측정 13
4) Hydrogen peroxide 소거능 측정 14
5) Nitric oxide 소거능 측정 14
6) Antioxidant protection factor (PF) 측정 14
7) Thiobarbituric acid reaction substance (TBARs) 측정 14
마. 생리활성 15
1) Tyrosinase 저해활성 측정 15
2) Elastase 저해활성 측정 15
3) Hyaluronidase 저해활성 측정 15
4) 피부수렴활성 측정 15
5) Xanthine oxidase 저해활성 측정 16
6) ACE (Angiotensin converting enzyme) 저해활성 측정 16
바. 항균활성 16
3. 정금나무 열매 70% ethanol 추출물 및 열수 추출물의 생리활성 17
가. 시약 및 기기 17
1) 시약 17
2) 기기 17
3) 물질분석 17
나. 실험재료 18
다. 추출물 제조 18
라. 생리활성 18
1) 총 폴리페놀 함량 측정 18
2) 전자공여능 측정 18
3) ABTS+ radical 소거능 측정 19
4) SOD 유사활성 검증 19
마. Raw 264.7을 이용한 항염증 활성 측정 20
1) 세포배양 20
2) MTT assay에 의한 세포 생존율 측정 20
3) NO 생성억제 20
4) Western blot을 통한 단백질 발현 측정 21
5) Total RNA 분리 및 cDNA 합성 21
6) Reverse transcription PCR 21
바. 정금나무 열매 추출물의 H. pylori 항균활성 측정 23
1) 정금나무 추출물의 H. pylori in vitro 항균활성 분석 (Minimal Inhibitory Concentration Assay) 23
가) H. pylori 균주 및 배양 23
나) 시료의 정제 및 정량측정 25
다) 디스크확산법을 이용한 항균활성 측정 25
라) Agar dilution test 25
2) 정금나무 추출물의 H. pylori 균주의 in vivo 항균활성 분석 27
가) H. pylori 균주 및 배양 27
나) 실험동물 27
다) H. pylori 감염 27
라) 약물 투여 27
마) 임상증상 관찰 및 체중 측정 28
바) 감염의 정량적 분석 28
사) 통계처리 29
4. 정금나무 열매 70% 에탄올 추출물의 활성물질 정제 및 구조동정 분석 30
가. 추출 및 분리 30
나. UPLC 분석조건 32
다. 표준품의 검량선 작성 및 직선성 검토 32
라. 정금나무 열매의 성분함량 비교 33
5. 정금나무 열매 70% 에탄올 추출물 정제물의 생리활성 및 세포 미백 활성 측정 34
가. 정제물의 항산화 활성 및 효소 저해활성 측정 34
1) 항산화 활성 측정 34
2) Tyrosinase 저해활성 측정 34
나. 정제물의 B16F10 melanoma cell에서의 세포 미백활성 측정 34
1) 세포배양 34
2) MTT assay에 의한 세포 생존율 측정 34
3) Western blot을 통한 단백질 발현 측정 35
4) Reverse transcription-polymerase chain reaction (PCR)을 통한 mRNA 발현 측정 35
Ⅳ. 결과 및 고찰 37
1. 안면도 정금나무 군락지 식생조사 결과 37
가. 식물사회학적 군락유형분류 37
1) 식생단위 1(정금나무군락-윤노리나무군-합다리나무소군) 40
2) 식생단위 2(정금나무군락-윤노리나무군-대팻집나무소군) 40
3) 식생단위 3(정금나무군락-줄딸기군) 40
4) 식생단위 4(정금나무군락-아까시나무군) 40
5) 식생단위 5(정금나무전형군락) 41
나. 중요치 42
1) 식생단위 1 (정금나무군락-윤노리나무군-합다리나무소군) 42
2) 식생단위 2 (정금나무군락-윤노리나무군-대팻집나무소군) 42
3) 식생단위 3 (정금나무군락-줄딸기군) 42
4) 식생단위 4 (정금나무군락-아까시나무군) 43
5) 식생단위 5 (정금나무전형군락) 43
다. 종다양도 47
라. CCA 48
1) 식생단위와 생물적/비생물적 환경인자와의 상관관계 48
2) 정금나무 출현/비출현 조사구와 토양인자와의 상관관계 51
3) 정금나무 군락의 토양 화학적 분석 53
2. 정금나무 열매 70% 아세톤 추출물의 생리활성 54
가. 추출물의 항산화 활성 측정 54
1) 폴리페놀 함량 측정결과 54
2) 전자공여능 측정 결과 55
3) ABTS+ radical 소거능 측정 결과 56
4) Hydrogen peroxides 소거능 58
5) Nitric oxide radical 소거능 59
6) PF 및 TBARS 측정 결과 60
나. 추출물의 생리활성 측정 61
1) Tyrosinase 저해 활성 측정 결과 61
2) Elastase 저해 활성 측정 결과 62
3) 피부 수렴활성 측정 결과 62
4) Hyaluronidase (HAase) 저해 활성 측정 결과 62
5) Xanthine oxidase (XOase) 저해 활성 측정 결과 64
6) ACE 억제 효과 65
다. 항균활성 66
3. 정금나무 열매 70% ethanol 추출물 및 열수 추출물의 생리활성 67
가. 항산화 활성 67
1) 총 폴리페놀 함량 측정 결과 67
2) 전자공여능 측정 결과 68
3) ABTS+ radical 소거능 측정 69
4) SOD 유사활성 측정 70
나. 정금나무 열매 70% ethanol 추출물의 항염증 활성 71
1) MTT assay에 의한 세포 생존율 측정 결과 71
2) Nitric oxide (NO) 저해활성 측정 결과 72
3) iNOS 및 COX-2 단백질 및 mRNA 발현 억제 효과 측정 73
다. 정금나무 추출물의 H. pylori 항균활성 분석 77
1) 정금나무 추출물의 H. pylori in vitro 항균활성 분석 77
가) 디스크확산법을 이용한 항균활성 측정 77
나) Agar dilution test 77
2) 정금나무 추출물의 H. pylori in vivo 항균활성 분석 89
가) 임상증상 발현 유무 및 체중 변화 89
나) H. pylori 감염의 정량적 분석 89
다) H. pylori 감염 수치의 통계적 분석 98
4. 정금나무 열매 70% ethanol 추출물의 활성물질 정제 및 분석 결과 99
가. 정금나무 열매 분리 화합물의 1H- 및 13C-NMR 분석 결과 99
나. 분석조건의 확립 100
다. 화합물에 대한 직선성 100
라. 정금나무 열매 에틸아세테이트 분획물의 성분함량 비교 101
5. 정금나무 열매 70% ethanol 추출물 정제물의 생리활성 102
가. 정제물의 항산화 활성 및 효소 저해 활성 102
1) 전자공여능 측정 결과 102
2) ABTS+ radical 소거능 측정 결과 104
3) Tyrosinase 저해 활성 측정 결과 106
나. 정제물의 미백 효과 측정 결과 108
1) MTT assay에 의한 세포 생존율 측정 결과 108
2) Western blot을 통한 단백질 발현 측정 결과 110
3) RT-PCR을 통한 mRNA 발현 억제 효과 측정 결과 114
Ⅴ. 결론 118
참고문헌 126
영문초록 138
별첨 1. 화합물 1-3 NMR data 140
별첨 2. 정금나무 열매 추출물 및 화합물의 1-3 UPLC 분석 결과 147