최근 의료과학 기술의 발달로 평균 기대수명이 연장되면서 항노화(anti-aging)에 관한 관심이 높아지고 있다. 이와 관련하여 다양한 기능성 화장품이 개발되고 있으나 부작용 사례 역시 증가하고 있는 추세이다. 이에 독성이 없는 물질에 관한 관심이 높아지면서 천연소재를 활용한 연구가 활발히 진행되고 있지만 인체적용실험의 실증적 연구는 부족한 실정이다. 따라서 본 연구의 목적은 금은화·감초·표고버섯 복합추출물의 생리활성을 분석하여 효능을 검증하고 인체적용실험을 통해 금은화·감초·표고버섯 복합추출물이 중년여성의 안면피부 개선에 어떤 효과를 미치는지 알아보고자 하였다. 연구 방법은 세포독성 및 DPPH radical 소거활성, 항염증 검증, 총 페놀함량, 총 플라보노이드 함량 분석 후 인체적용실험을 진행하였다. 인체적용실험은 40∼60대의 중년여성을 대상으로 2019년 6월 24일∼2019년 7월 19일까지 총 4주 동안 실시하였으며 금은화·감초·표고버섯 복합추출물이 함유된 화장품을 제조하여 안면피부 개선효과를 살펴보았다. 본 연구의 결과는 다음과 같다. 금은화·감초·표고버섯 복합추출물의 세포독성평가를 살펴본 결과, 세포 생존율이 안정적이었으며 DPPH radical 소거활성 결과, 금은화·감초·표고버섯 복합추출물 50% EtOH 200 μg/mL에서 높은 소거활성을 보였다. 항염증 효과를 규명하기 위하여 RAW 264.7 세포에서 금은화·감초·표고버섯 복합추출물이 LPS 처리군에 비해 NO 생성이 농도 의존적으로 우수한 억제율을 보였다. 또한, 금은화·감초·표고버섯 복합추출물의 항산화 활성 분석 결과, 페놀과 플라보노이드의 성분이 함량 되어있음을 확인하였다. 이러한 결과를 바탕으로 금은화·감초·표고버섯 복합추출물의 세포생리활성 효과가 우수하다는 것을 검증하였으며 금은화·감초·표고버섯 복합추출물 10% 함유 스킨, 로션, 크림을 제조하여 인체적용실험을 진행하였다. 안면피부 분석 결과, 모공은 0주차에 비하여 4주차에는 모공의 크기가 줄어들거나 모공의 수가 줄어들었으며 피지 측정 결과 시간이 지남에 따라 피지량이 감소되는 것으로 나타나 금은화·감초·표고버섯 복합추출물이 피지조절 효과가 있음을 확인하였다. 색소침착 측정 결과, 편광에 의해 촬영되는 표피층 색소침착의 변화는 수치가 감소하여 안면 표피층 색소침착에 유효한 효과를 주는 것으로 확인되었다. 주름 측정 결과, 시간이 지남에 따라 유의적으로 주름이 감소하였으며 특히, 눈가 주름에 큰 효과를 보였다. 이상의 결과를 종합하여 볼 때 금은화·감초·표고버섯 복합추출물이 천연소재를 활용한 화장품 소재로서의 가능성이 우수하다는 것을 시사한다. 이러한 결과를 바탕으로 금은화·감초·표고버섯 복합추출물이 기능성 화장품 소재로써 활발히 활용되기를 기대하며 추후 금은화·감초·표고버섯 복합추출물에 대한 기능성 화장품 소재로서의 적합성을 파악할 수 있는 세부적인 기전연구가 필요할 것으로 사료 된다.
Dept. of Cosmetology, Graduate School of Dongshin University (Supervised by Seo, Seung Hee)
With extension of the average life expectancy owing to recent advances in medical science, interest in anti-aging has been growing. Accordingly, various functional cosmetic products are being developed, but an increasing number of cases have shown adverse effects. Owing to the increased interest in non-toxic substances, studies using natural ingredients have been actively conducted. However, empirical studies on human application are still lacking. Therefore, the objective of this study was to test the efficacy of the Lonicera japonica·Glycyrrhiza uralensis Fisch.·Lentinula edodes complex extract by analyzing its physiological activities and determine the effects of the Lonicera japonica·Glycyrrhiza uralensis Fisch.·Lentinula edodes complex extract on facial skin enhancement in middle-aged women via a human trial. Our methods included a cytotoxicity test, DPPH radical scavenging activity test, anti-inflammatory test, and analysis of the total phenol and total flavonoid contents, followed by a human trial. The human trial was conducted over a four-week period between June 24th and July 19th, 2019, and the study population consisted of middle-aged women from 40 to 69 years old. A cosmetic product containing the Lonicera japonica·Glycyrrhiza uralensis Fisch.·Lentinula edodes complex extract was prepared and used to investigate its facial skin enhancement effect. The findings in this study were as follows. In the cytotoxicity test, the Lonicera japonica·Glycyrrhiza uralensis Fisch.·Lentinula edodes complex extract showed stable cell viability. In the DPPH radical scavenging activity test, the Lonicera japonica·Glycyrrhiza uralensis Fisch.·Lentinula edodes complex extract showed a high scavenging activity at 200 μg/mL of 50% EtOH. In the anti-inflammatory test, RAW 264.7 cells treated with the Lonicera japonica·Glycyrrhiza uralensis Fisch.·Lentinula edodes complex extract showed a superior concentration-dependent inhibitory effect on Nitric oxide(NO) synthesis than cells treated with Lipopolysaccharide(LPS). Moreover, results of the analysis on the antioxidant activity of the Lonicera japonica·Glycyrrhiza uralensis Fisch.·Lentinula edodes complex extract confirmed the phenyl and flavonoid contents. Based on these results, the Lonicera japonica·Glycyrrhiza uralensis Fisch.·Lentinula edodes complex extract was ascertained to have excellent cellular physiological activities. Accordingly, facial toner, lotion, and facial cream samples containing 10% Lonicera japonica·Glycyrrhiza uralensis Fisch.·Lentinula edodes complex extract were prepared and used in the human trial. The facial skin analysis results showed that the size and number of pores decreased by week 4 compared to week 0, while the sebum levels decreased over time. The results confirmed that the Lonicera japonica·Glycyrrhiza uralensis Fisch.·Lentinula edodes complex extract shows a sebum-controlling effect. In the pigment darkening measurements, changes in the epidermal pigment darkening imaged under polarized light showed a decreased value, which confirmed the efficacy for facial epidermal pigment darkening. In the wrinkle measurements, the results showed significant decrease in wrinkles over time, especially those around the eyes, i.e., crow’s feet. These finding ssuggested that the Lonicera japonica·Glycyrrhiza uralensis Fisch.·Lentinula edodes complex extract has excellent potential as an ingredient in cosmetic products using natural ingredients. Based on these findings, the Lonicera japonica·Glycyrrhiza uralensis Fisch.·Lentinula edodes complex extract is expected to be widely used as an ingredient in functional cosmetic products; however, future studies on the specific mechanisms are required to determine the suitability of the Lonicera japonica·Glycyrrhiza uralensis Fisch.·Lentinula edodes complex extract as an ingredient in functional cosmetic products.
목 차국문초록 ⅷⅠ. 서 론 11. 연구의 필요성 및 목적 12. 용어의 정의 53. 논문의 구성 5Ⅱ. 이론적 배경 61. 복합추출물의 정의 62. 금은화·감초·표고버섯의 효능 및 활용 82.1 금은화 92.2 감초 112.3 표고버섯 13Ⅲ. 연구재료 및 실험 방법 151. 재료 151.1 약재 151.2 세포 배양 151.3 시약 161.4 기기 162. 세포 및 생리활성 실험 방법 172.1 금은화·감초·표고버섯 복합추출물 제조 172.2 세포 독성 측정 172.3 DPPH radical 소거활성 측정 182.4 염증으로부터 세포 보호 효과 측정 182.5 총 페놀함량 측정 192.6 총 플라보노이드 함량 측정 193. 인체적용실험 방법 213.1 연구대상 및 기간 213.1.1 연구대상자 선정기준 213.1.2 연구대상자 선정제외기준 213.1.3 중도탈락기준 223.2 인체적용실험 재료 및 방법 233.2.1 금은화·감초·표고버섯 복합추출물을 이용한 화장품 제조 233.2.2 금은화·감초·표고버섯 복합추출물 화장품 사용방법 293.2.3 측정기기 303.2.4 실험 설계도 334. 주관적 설문평가 345. 피부 자극도 평가 346. 자료 분석 35Ⅳ. 연구결과 361. 금은화·감초·표고버섯 복합추출물의 세포 및 생리활성 검증 361.1 세포 독성 361.2 DPPH radical 소거활성 391.3 항염증 효과 411.4 총 페놀함량 441.5 총 플라보노이드 함량 472. 금은화·감초·표고버섯 복합추출물 화장품의 임상 효능 평가 502.1 연구대상자의 일반적 특성 502.1.1 인구통계학적 특성 502.1.2 연구대상자의 생활 습관 522.2 연구대상자의 건강상태 및 피부타입 자가진단 542.2.1 건강상태 점검 542.2.2 자가 피부 특성 인식 542.3 연구대상자의 안면 피부 평가 572.3.1 모공(Pores) 측정 572.3.2 피지(Sebum) 측정 602.3.3 편광에서의 색소침착(Spots-PL) 측정 632.3.4 주름(Wrinkles) 측정 662.4 실험 후 주관적 설문평가 732.4.1 피부 이상 반응 평가 732.4.2 금은화·감초·표고버섯 복합추출물 화장품 효능 설문평가 75Ⅴ. 고찰 77Ⅵ. 결론 84References 86Abstract 95[부 록] 98