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논문 기본 정보
- 자료유형
- 학위논문
- 저자정보
- 지도교수
- 전태준
- 발행연도
- 2020
- 저작권
- 인하대학교 논문은 저작권에 의해 보호받습니다.
이용수79
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국소마취제는 국소 부위의 신경 세포 막 안쪽으로 투과하여 voltage gate sodium channel에 결합하여 막전위를 억제하여 신경전달을 막는 약물로, 주로 병원에서 국소부위의 외과적 시술에 대한 고통을 다루는데 사용되고 있다. 하지만 국소 마취제는 막단백질뿐만 아니라 막에 결합하여 막의 열적 안정성을 떨어뜨리고, 유동성, 투과성, lipid packing order등 막의 성질을 변화시킬 수 있다. 이러한 국소마취제의 막에 대한 영향을 분석하기 위하여, 우리는 병원에서 가장 많이 사용되고 있는 국소마취제인 lidocaine과 tetracaine을 피부 세포 중 하나인 CCD-1064sk(fibroblast, human skin)에 대하여 morphological 분석을 통하여 확인하였고, Lactate Dehydrogenase를 이용하여 각 약물의 IC50을 도출하였다. 더 나아가 인공세포막을 만들어 오직 인공세포막에 미치는 영향만을 통제된 환경에서 정량적으로 측정하였다. 먼저, Polydiacetylene을 이용하여 인공세포막 구조체(Vesicle)를 만든 뒤 국소마취제가 binding할 경우 색이 변화하는 정도를 비교하여 각 국소마취제의 binding affinity를 측정하였다. 또한 막의 상태변화가 막단백질에 미치는 영향을 정량화 하기 위하여 모델 단백질(gramicidin A)을 선정하고 free-standing lipid bilayer상에서 모델 단백질의 pore가 열리고 닫히는 시간이 국소마취제의 농도에 따라 변화하는 정도를 측정하였다. 우리는 제시한 방법들의 실험을 통해 각 약물이 막에 미치는 영향을 정량적으로 분석하였으며, affinity와 구조적 특성의 차이에 따라 생체막과 단백질에 주는 영향이 다름을 증명하였다.
목차
Abstract 1Table of Contents 3List of Abbreviations 4List of Figures 61. Introduction 72. Materials and Methods 102.1. Cell culture 102.2. Scanning Electron Microscope(SEM) 112.3. Lactate Dehydrogenase(LDH) Assay 132.4. Cell Counting Kit-8(LDH) Assay 142.5. Colorimetric Assay with Polydiacetylene(PDA) Liposome 152.6. Electrophysiology Assay with Amplifier 163. Results and Discussion 183.1. Quantitative Cytotoxicity Measurement and Identification of Membrane Effects on CCD-1064sk Using Lactate Dehydrogenase(LDH) Assay 183.2. Membrane Affinity Analysis Using Colorimetric Assay with Poly Diacetylene Vesicle 223.3. Effect of Membrane Physical Property Effect Using Model Protein Gramicidin A 254. Conclusions 305. References 32
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