수박(Citrullus spp.)은 전세계에서 경제적으로 중요한 채소작물이며, 라이코펜과 시트룰린, 베타카로틴과 같은 기능성 물질을 함유하고 있다. Didymella bryoniae 병원균에 의해 발생되는 덩굴마름병은 수박 재배에서 가장 피해를 많이 주는 병해 중에 하나이다. 그러므로, ‘920533(모친, 감수성 계통)’과 ‘PI 189225(부친, 저항성 계통)’ 간의 교배로부터 유래된 F2 집단에서 덩굴마름병 저항성과 연관된 양적형질 유전자좌를 탐색하는 것을 목표로 하였다. 178개의 F2 식물체 병저항성은 잎 병반면적률(LL, 0~100), 줄기마름 증상(SB, 0~3), 발병지수(DI, 0~7), 그리고 저항성과 감수성(RS, 0 또는 1)을 포함하는 4개의 점수화 방법을 사용하여 측정되었다. 결과적으로, 유전분석된 결과는 덩굴마름병 저항성이 양적으로 조절됨을 나타냈다. 양적형질 유전자좌(QTL)를 분석하기 위해, 62개의 HRM 분자표지와 113개 Fluidigm® 분자표지로 구성된 전체 175개의 단일염기다형성 (SNP) 분자표지를 사용함으로써 수박 유전자 연관지도가 작성되었으며, 구성된 유전자 연관지도의 전체 유전적 거리는 1,111.4 cM이었고 분자표지 간 평균거리는 6.74 cM이었으며 연관그룹당 분자표지의 평균 개수는 15개였다. QTL 분석 결과, 수박에서 덩굴마름병 저항성에 대한 4개의 QTL을 탐색하였다. 이 중에 염색체 8번에 위치한 3개의 QTL인 qLL8.1, qSB8.1 그리고 qDI8.1은 각각 22.46, 83.65 그리고 21.60%의 표현형 변이를 설명하는 주동 QTL로 확인되었다. 미동 QTL인 qSB6.1은 오직 줄기마름 증상(SB) 한 형질에 대해 염색체 6번에 탐색되었으며, 5.4%의 표현형 변이를 설명하였다. 게다가, QTL과 인접한 분자표지 4개를 선발하였는데 이것은 주동 QTL의 인접한 분자표지인 chr8_1060_18867과 chr8_1392_21637, 그리고 미동 QTL의 인접한 분자표지인 chr6_1397_7385와 chr6_1775_7762이었다. 이 분자표지들은 덩굴마름병 저항성인 수박 품종을 개발하는 데 도움이 될 것으로 생각한다.
Watermelon (Citrullus spp.) is an economically important vegetable crop worldwide and contains functional compounds such as lycopene, citrulline, and β-carotene. Gummy stem blight (GSB) caused by a pathogen Didymella bryoniae is one of the most damaging diseases in watermelon cultivation. Therefore, we aimed to identify quantitative trait loci (QTLs) associated with GSB resistance in an F2 population derived from a cross between ‘920533’ (a female and susceptible line) and ‘PI 189225’ (a male and resistant line). The resistance of 178 F2 plants was assessed by four different scoring methods including leaf lesion (LL, 0~100), stem blight (SB, 0~3), disease index (DI, 0~7), and resistance and susceptibility (RS, 0 or 1). In result, inheritance analysis revealed that GSB resistance is quantitatively controlled. To analyze QTLs, a watermelon genetic linkage map covering total genetic distance of 1,111.4 cM with an average marker interval of 6.74 cM and a mean of 15.0 markers per linkage group was constructed by using a total of 175 SNP markers consisting of 62 HRM and 113 Fluidigm® markers. QTL analysis revealed a total of four QTLs for GSB resistance in watermelon. Of them, three QTLs, qLL8.1, qSB8.1, and qDI8.1, located on chromosome 8 were identified as major QTLs explaining phenotypic variations of 22.46, 83.65, and 21.60%, respectively. A minor QTL qSB6.1 with 5.4% of phenotypic variation was also detected on chromosome 6 only in a trait, stem blight (SB). In addition, total four QTL-linked markers were selected including two flanking markers, chr8_1060_18867 and chr8_1392_21637, for the major QTL and two flanking markers, chr6_1397_7385 and chr6_1775_7762, for the minor QTL. These markers will be helpful to develop resistant cultivars to GSB in watermelon.
Introduction 1Literature Review 4Watermelon (Citrullus spp.) 4Gummy stem blight disease in watermelon 6High resolution melting analysis 7Molecular markers and QTL mapping in watermelo 8Materials and Methods 11Plant materials 11Inoculation method 11Disease assessment 12DNA extraction 16SNP genotyping using Fluidigm SNP typeTM assays 16Next-generation sequencing and SNP detection 16HRM primer design and analysis 17Linkage mapping analysis 18QTL analysis 18Results 20Resistance to GSB in parents and an F2 population 20SNP genotyping using Fluidigm SNP typeTM assays 20A large number of SNPs detection using NGS 27Development of HRM markers using SNPs 27Construction of a watermelon linkage map 33Identification of significant QTLs associated with resistance to GSB in watermelon 33Discussion 45Inheritance of GSB resistance in watermelon 45Fluidigm SNP genotyping system 45HRM markers based on SNPs identified by using NGS 46QTLs for GSB resistance 46Conclusion 47Literature cited 48Abstract in Korean 57