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논문 기본 정보

자료유형
학위논문
저자정보

권세창 (강원대학교, 강원대학교 대학원)

지도교수
허원
발행연도
2019
저작권
강원대학교 논문은 저작권에 의해 보호받습니다.

이용수15

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이 논문의 연구 히스토리 (2)

2019

젤라틴 수식된 피브로인 미세구에 의한 부착성 세포의 이동촉진과 3차원 부유 배양
권세창 생물공학과 2019.01 학위논문

2018

피브로인 미세구 첨가에 의한 3T3 섬유아 세포의 이동 촉진
권세창 ,  전현상 ,  류다영 외 2명 KSBB Journal 2018.03 학술저널

초록· 키워드

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젤라틴은 부분적으로 가수 분해된 형태의 콜라젠이다. 본 연구에서는 젤라틴을 피브로인 미세구에 수식시켜 잠재적 결합 부위를 인위적으로 부여한 피브로인 미세구를 세 가지 방법으로 제조하였다. 각각 제조된 미세구를 이용하여 실험을 진행하였다.
피브로인 미세구는 무혈청 조건에서도 3T3 세포의 이동을 자극 시켰다. 접촉저해가 없는 조건에서, 3T3 세포는 젤라틴 효소 수식 미세구를 포함한 무혈청 DMEM 배지에서 2.1 μm/min의 가장 높은 이동속도를 나타냈다. 개별 세포의 이동속도는 10% 혈청이 포함된 배지보다 81% 더 빠르며 무혈청 배지보다 141% 더 빨랐다. 3차원 배양된 세포를 2차원 단층으로 옮긴 실험의 결과로 미세구가 포함된 배지에서는 3T3 세포는 단층 배양 콜로니를 형성되었으나, 무혈청 배지에서는 형성되지 않았다. 2차원 단층 배양에서 나노입자들과 달리, 미세구는 3T3의 세포 이동을 자극하여 상처 치유 자극의 잠재적인 후보자로서의 가능성이 있을 것으로 추정된다.
3차원 세포 배양 시스템은 단층 배양에 비해 세포 분화 및 조직 형성을 촉진하기 때문에 주목받고 있다. 본 연구는 젤라틴으로 수식된 미세구를 이용하여 지지체 의존성 세포의 3차원 배양에 이용하였다. 젤라틴 수식 미세구를 3차원 세포 응집체의 증식과 생존을 도와주는 분산된 지지체로써 사용될 수 있는지를 조사하였다. 또한 세포의 증식을 복제된 DNA의 형광으로 측정할 수 있는 키트인 Click-iTTM Plus EdU Alexa FluorTM 488 Flow Cytometry Assay Kit를 이용하여 3차원 배양에서 세포 성장에 최적 조건을 조사하였다.
인간 진피 섬유아세포 (Human Dermal Fibroblasts, HDF)에 미세구와 젤라틴 수식 미세구를 첨가하여 비부착 조건에서 3차원 부유 배양을 시도하였다. 인간 진피 섬유아세포를 이용하여 젤라틴으로 수식된 미세구를 첨가하면 세포의 사멸을 막아주며 세포의 성장도 일어나는 것을 확인하였다. 일반적으로 피부는 지속적으로 기능을 유지하기 위하여 느리게 성장하고 사멸을 반복하므로 인공 피부로써 개발될 가능성을 보여주었다.
#젤라틴 #수식 #피브로인 미세구 #부착성 세포 #세포 이동 #3차원 부유 배양 #인공 피부

목차

목 차
List of Tables vi
List of Figures vii
1. 서론 1
1.1 젤라틴을 이용한 피브로인 미세구 수식 1
1.2 동물 세포의 이동 3
1.3 부착성 세포의 부유 배양 5
2. 재료 및 방법 7
2.1 재료 7
2.2 미세구의 제조 및 수식 8
2.2.1 피브로인 미세구의 제조 8
2.2.2 젤라틴이 코팅된 미세구의 제조 8
2.2.3 젤라틴이 포함된 미세구의 제조 9
2.2.4 젤라틴 펩타이드를 이용한 피브로인 미세구의 효소적 수식 10
2.2.5 고분해능 주사 전자 현미경을 이용한 분석 10
2.2.6 시차 주사 열량법 (DSC) 분석 11
2.2.7 Fluoroskan Ascent를 이용한 분석 11
2.3 동물 세포 배양 12
2.3.1 세포의 평판 배양 12
2.3.2 세포의 부유 배양 13
2.4 2차원 평판 배양 실험 및 분석방법 14
2.4.1 세포 이동성 측정 (Migration Test) 14
2.4.2 세포 이동속도 측정 15
2.4.3 EdU를 이용한 세포 이동 분석 16
2.5 3차원 부유 배양 실험 및 분석방법 17
2.5.1 세포 수 측정 17
2.5.2 포도당 측정 17
2.5.3 공초점 레이저 주사 현미경 18
2.5.4 유속 세포 분석기 18
2.6 Western blot 19
2.7 통계처리 20
3. 결과 및 고찰 21
3.1 피브로인 미세구에 의한 3T3 세포의 이동 촉진 21
3.1.1 피브로인 미세구 제조 21
3.1.2 미세구에 의한 3T3 세포의 이동 촉진 21
3.1.3 세포 이동속도 측정 23
3.1.4 미세구에 의한 3차원 세포 응집체의 부착 촉진 27
3.2 젤라틴을 이용한 피브로인 미세구의 수식 32
3.2.1 젤라틴을 이용한 미세구 코팅 32
3.2.2 젤라틴 코팅 미세구를 이용한 3T3 세포의 이동과 증식 35
3.2.3 젤라틴을 포함하는 피브로인 미세구 제조 41
3.2.4 젤라틴 펩타이드를 이용한 피브로인 미세구의 효소적 수식 44
3.2.5 젤라틴 수식 미세구의 비교 47
3.3 젤라틴 수식 미세구의 세포 이동 촉진 54
3.3.1 젤라틴 수식 미세구에 의한 3T3 세포의 이동 54
3.3.2 젤라틴 수식 미세구에 의한 HDF 세포의 이동 57
3.3.3 젤라틴 수식 미세구에 의한 세포 이동속도 60
3.4 미세구를 이용한 부착성 세포의 3차원 배양 64
3.4.1 피브로인 미세구 첨가에 의한 3T3 세포의 3차원 배양 64
3.4.2 젤라틴 수식 미세구를 이용한 3T3 세포의 3차원 배양 72
3.4.3 젤라틴 수식 미세구를 이용한 HDF 세포의 3차원 배양 83
3.4.4 2차원, 3차원 배양 시 세포의 부착 신호 분석 90
4. 결론 93
참고문헌 95
Abstract 104

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