연구 목적 : 소청룡탕 추출물(SRE)이 골다공증을 치료하고 예방하는 수단으로 사용 가능 한지를 평가하기 위하여 파골세포 분화 및 유전자 발현, 골흡수에 미치는 영향을 측정하고자 하였다.
연구 방법 : 소청룡탕 추출물(SRE)을 사용하여 골흡수를 유발하는 파골세포에 미치는 영향에 대하여 실험하였다. 파골세포의 경우 RAW264.7 cell을 RANKL 처리를 하여 사용하였고, TRAP 형성억제 효과 및 분화과정 중 발현되는 골흡수 인자인 TRAP, cathepsin K, NFATc, MMP-9의 발현을 측정하고, 염증관련 인자, 조직 발생에 미치는 인자들의 발현에 미치는 영향을 측정하였다. 또한, 골흡수에 미치는 영향을 평가하기 위하여 RANKL 처리한 파골세포를 골편상에서 배양하며 생성되는 흡수 흔적을 관찰하였다.
결과 : 소청룡탕 추출물(SRE)은 RANKL로 자극한 RAW 264.7 파골전구세포가 파골세포로 분화하는 것을 억제하였고, RANKL 처리로 인하여 증가하는 Cathepsin K, NAFTc1, TRAP, MITF, c-Fos, MMP-9, iNOS, IL-6, TNFa, OC-STAMP, COX-2, CTR 유전자의 발현을 억제하였다. 이와는 별도로, 파골세포 작용으로 인한 골흡수에 의한 골조직 상처 생성을 억제하였다.
연구 결론 : 이상의 결과 소청룡탕 추출물(SRE)은 파골세포의 분화 및 골흡수를 억제하는 것을 확인할 수 있었고, 이를 통하여 골다공증의 치료하고 예방하는 수단으로 이용될 수 있을 것으로 판단되었다.
Objectives : This study was performed to evaluate effects of Sochungryong-tang Extract(SRE) on osteoclast differentiation and bone resorptionin order to find out the possibility for clinical use in preventing and treating osteoporosis.
Methods : To evaluate the effect of SRE on osteoclast differentiation, we induced RAW 264. 7 cells to be differentiated to osteoclasts by RANKL. We measured effect on TRAP, NFATc, cathepsin K, MMP-9, inflammation related factors, histogenesis factors and bone resorption.
Results : SRE decreased osteoclast differentiation, and also decreased expression of bone resorbing factors such as MMP-9, cathepsin K, TRAP, NFATc1, MITF, c-Fos, OC-STAMP, CTR in RANKL-induced osteoclast. SRE also decreased COX-s, iNOS, TNF-α, which are thought to be related with the inflammatory bone destruction.
Conclusion: SRE inhibits osteoclast differentiation and bone resorption. The results indicate that the BHT extract can potentially be applied for preventing and treating osteoporosis.
Ⅰ. 서론 1Ⅱ. 재료 및 방법 31. 재료 31) 한약재 추출 및 검액 제조 32) 세포 32. 방법 41) RAW 264.7 Cell 배양 42) 약물처리 43) 파골세포 생성 측정 44) 파골세포 유전자발현 측정 5(1) Total RNA 분리 5(2) cDNA 제조 5(3) Real time RT-PCR 65) Bone resorption Assay 73. 통계처리 7Ⅲ. 결과 81. SRE가 Cell Viability 에 미치는 영향 82. SRE가 파골세포 분화 및 기능에 미치는 영향 91) SRE가 파골세포 형성에 미치는 영향 92) SRE가 TRAP 발현에 미치는 영향 113) SRE가 MMP-9 발현에 미치는 영향 124) SRE가 cathepsin K 발현에 미치는 영향 133. SRE가 파골세포 분화 관련 인자에 미치는 영향 141) SRE가 NFATc1 발현에 미치는 영향 142) SRE 가 c-Fos 발현에 미치는 영향 153) SRE가 MITF 발현에 미치는 영향 164. SRE가 iNOS, COX-2, TNF-a, IL-6 발현에 미치는 영향 175. SRE가 파골세포 융합 관련인자에 미치는 영향 211) SRE가 OC-STAMP, CTR 발현에 미치는 영향 212) SRE 가 bone pit 형성에 미치는 영향 24IV. 고찰 25V. 결론 30참고문헌 31