모발은 신체 보호 및 체내 노폐물 배출 등의 역할과 더불어 개인의 자존감에 영향을 미친다. 따라서 탈모 예방 및 건강한 모발을 유지하기 위한 관심이 증가되고 있지만 고가의 치료 및 관리 비용과 치료제의 부작용, 효과가 확실하지 않은 기능성 제품 등으로 인해 어려움을 겪는 것으로 나타났다. 이러한 문제점을 개선하기 위해 모낭 주기 및 모발 성장에 관여하는 모유두세포를 이용한 연구가 진행되고 있으며, 본 연구는 모유두세포와 섬유아세포의 증식 및 관련 신호전달 경로에 미치는 영향을 평가하였다. 밀싹 추출물의 세포증식 효과는 MTT assay를 실시하였으며, ERK, Akt, Wnt/β-catenin 신호 경로, apoptosis 관련 인자, 5α-reductase의 발현을 western blot 분석을 통해 측정하였다. 밀싹 추출물은 인체 모유두세포와 섬유아세포의 증식을 유의하게 증가시켰고, 세포증식에 관여하는 ERK와 Akt의 인산화를 촉진하였으며, 밀싹 추출물에 의해 증가된 ERK, Akt 인산화 촉진과 세포증식은 MEK/ERK 억제제 PD98059와 PI3K/Akt 억제제 LY294002에 의해 유의하게 감소되었다. 또한 밀싹 추출물은 apoptosis 인자인 Bax, caspase-3, 8, 9의 발현 억제 및 Bcl-2의 발현을 증가시켰으며, GSK-3β(Ser9)의 인산화를 통한 β-catenin(Ser552, 675)의 인산화를 촉진함으로써 핵 내의 β-catenin 축적을 유도하였고, 5α-reductase type Ⅰ, Ⅱ의 활성을 억제하였다. 결론적으로, 밀싹 추출물은 모유두세포와 섬유아세포의 ERK, Akt 경로의 활성화와 apoptosis 방어기전을 통해 세포의 증식을 유도하며, β-catenin 신호 경로 활성화 및 5α-reductase 활성 억제를 통해 모발 성장 및 탈모 예방에 도움이 될 수 있음을 제안한다.
Hair protects body, excretes waste matter from the body, and makes effect on self-esteem. Therefore, although there is a growing interest in preventing hair loss and maintaining healthy hair is increasing, it has been found that many people are experiencing difficulties as high-priced treatment and management cost, side effects of medicine, and functional products with undefined efficacies. Researches using hair dermal papilla cells involved in hair follicle cycle and hair growth are being conducted to improve these problems, and this study evaluated the effects on proliferation of human hair dermal papilla cells and fibroblast and related signaling pathway. MTT assay was conducted for cell proliferation effect of wheat sprout extract, and measured ERK, Akt, Wnt/β-catenin signaling pathway, apoptosis related factor, and 5α-reductase expression through western blot analysis. Wheat sprout extract significantly increased hair dermal papilla cells of human body and propagation of fibroblast, promoted phosphorylation of ERK and Akt that get involved in cell proliferation, and increased ERK by wheat sprout extract, promotion of Akt phosphorylation, and cell proliferation significantly decreased by MEK/ERK inhibitor PD98059 and PI3K/Akt inhibitor LY294002. Also, wheat sprout extract suppressed expression of apoptosis factors as Bax, caspase-3, 8, 9 and increased expression of Bcl-2, induced intranuclear β-catenin accumulation by promoting phosphorylation of β-catenin (Ser552, 675) through phosphorylation of GSK-3β (Ser9), and suppressed activation of 5α-reductase type Ⅰ and Ⅱ. In conclusion, wheat sprout extract induces cell proliferation through vitalization of ERK and Akt route of human hair dermal papilla cell and fibroblast and apoptosis defense mechanism, and can be helpful in hair growth and hair loss prevention by vitalizing the β-catenin signaling pathway and inhibiting activation of 5α-reductase.
목차
Ⅰ. 서 론 11. 연구의 필요성 12. 연구의 목적 4Ⅱ. 이론적 배경 51. 모발 52. 모유두세포 83. 밀싹 10Ⅲ. 재료 및 방법 121. 재료 121) 약재 122) 세포주 123) 사용기기 124) 시약 132. 방법 141) 시료 추출 142) 세포배양 143) 세포생존율 측정 144) Western blot 분석 155) 통계처리 16Ⅳ. 결 과 17Part Ⅰ. 밀싹 추출물이 인체 모유두세포의 증식 및 신호전달기전에 미치는 영향1. 밀싹 추출물이 인체 모유두세포의 증식에 미치는 영향 172. 밀싹 추출물이 인체 모유두세포의 ERK 인산화에 미치는 영향 193. 밀싹 추출물이 ERK 인산화 경로를 통한 인체 모유두세포의 증식 촉진 효과 224. 밀싹 추출물이 인체 모유두세포의 Akt 인산화에 미치는 영향 245. 밀싹 추출물이 Akt 인산화 경로를 통한 인체 모유두세포의 증식 촉진 효과 276. 밀싹 추출물이 인체 모유두세포의 apoptosis 관련 인자에 미치는 영향 297. 밀싹 추출물이 인체 모유두세포의 Wnt/β-catenin 신호 경로에 미치는 영향 318. 밀싹 추출물이 인체 모유두세포의 5α-reductase의 발현에 미치는 영향 35Part Ⅱ. 밀싹 추출물이 인체 섬유아세포의 증식 및 신호전달기전에 미치는 영향1. 밀싹 추출물이 인체 섬유아세포의 증식에 미치는 영향 372. 밀싹 추출물이 인체 섬유아세포의 ERK 인산화에 미치는 영향 393. 밀싹 추출물이 ERK 인산화 경로를 통한 인체 섬유아세포의 증식 촉진 효과 424. 밀싹 추출물이 인체 섬유아세포의 Akt 인산화에 미치는 영향 445. 밀싹 추출물이 Akt 인산화 경로를 통한 인체 섬유아세포의 증식 촉진 효과 476. 밀싹 추출물이 인체 섬유아세포의 apoptosis 관련 인자에 미치는 영향 497. 밀싹 추출물이 인체 섬유아세포의 Wnt/β-catenin 신호 경로에 미치는 영향 518. 밀싹 추출물이 인체 섬유아세포의 5α-reductase의 발현에 미치는 영향 55Ⅴ. 고 찰 57Ⅵ. 결 론 62