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논문 기본 정보

자료유형
학위논문
저자정보

박명재 (대전대학교, 대전대학교 대학원)

지도교수
서영배
발행연도
2017
저작권
대전대학교 논문은 저작권에 의해 보호받습니다.

이용수6

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이 논문의 연구 히스토리 (2)

2017

히팅맨틀로 제조된 흑삼가미발효경옥고의 항산화 및 항염 효능 연구
박명재 한의학과 2017.01 학위논문
LPS로 염증유도된 RAW 264.74 세포에 대한 흑삼 첨가 경옥고의 항염증 효과
박명재 ,  김정수 ,  이아름 외 3명 대한본초학회지(본초분과학회지) 2017.01 학술저널

초록· 키워드

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1. 목적 및 필요성 : 瓊玉膏는 ≪東醫寶鑑≫2)에 “塡精 補髓 調眞養性 返老還童. 補百損 除百病 萬神俱足 五藏盈溢 髮白復黑齒落更生 行如奔馬 日進數服 終日不飢渴 功效不可盡述”이라 기록되어 滋陰潤肺하고 益氣補脾하는 유용한 처방이다. 최근에는 항산화, 항염작용을 기반으로 生理活性연구에 활용되는 한약제제이다.
그러나 전통적인 瓊玉膏는 중탕 제조방법을 이용함으로 복잡하고 장시간이 걸리는 불편함이 있다. 이에 본 연구에서는 제조상의 불편함의 개선을 위하여 직접 히팅맨틀 방식으로 제조함으로써 번거로움을 개선하고 편리성, 시간 단축성, 효능의 향상성을 알아보고자 하였다. 또한 직접 히팅맨틀 방식 제조 기법으로 각각의 瓊玉膏를 제조하여 항산화와 항염 작용의 효능을 확인하였다.

2. 방법 : 직접 히팅맨틀 방식으로 人蔘瓊玉膏(K1), 人蔘醱酵瓊玉膏(KF), 黑蔘瓊玉膏(BK1), 黑蔘醱酵瓊玉膏(BKF)를 각각 제조하였고 마우스 대식 세포주 (RAW 264.7)를 이용하여 실험을 하였다.
DPPH 라디칼 소거능에 의한 항산화 활성측정, RAW 264.7 세포주를 이용한 항산화 측정을 위해 NO 생성량 측정과 ROS 측정을 하였으며, 염증 싸이토카인 유전자 발현 분석을 위하여 염증인자인 NOS-II, COX-2, IL-1β, IL-6을 이용 mRNA 유전자 발현 분석을 하였고 염증 싸이토카인 IL-6와 TNF-α 생산량 발현 분석을 통하여 항산화와 항염 작용을 알아보았다.

3. 결과 및 고찰 : 본 실험을 통하여 각각의 瓊玉膏 별 항산화 및 항염작용을 분석하였다. DPPH 라디칼 소거능에 의한 항산화 활성은 黑蔘醱酵瓊玉膏 (BKF), 黑蔘瓊玉膏 (BK), 人蔘醱酵瓊玉膏 (KF), 人蔘瓊玉膏 (K1) 순으로 黑蔘醱酵瓊玉膏가 가장 항산화 작용이 우수했다. RAW 264.7 세포주에서 항산화 활성 분석 결과 NO 생성량은 黑蔘醱酵瓊玉膏 (BKF), 黑蔘瓊玉膏 (BK), 人蔘醱酵瓊玉膏 (KF), 人蔘瓊玉膏 (K1) 순으로 낮았으며, ROS 생성량 측정 결과 비 흑삼 군에서는 人蔘醱酵瓊玉膏 (KF), 人蔘瓊玉膏 (K1) 순으로, 흑삼 군에서는 黑蔘醱酵瓊玉膏 (BKF), 黑蔘瓊玉膏 (BK), 人蔘瓊玉膏 (K1) 순으로 ROS 생성량이 감소함에 따라 가미 흑삼 또는 발효한 瓊玉膏가 항산화 작용이 증가함을 확인하였다.
염증 싸이토카인 유전자 발현 분석 관련 염증 인자들 중 NOS-II, COX-2, IL-1β, IL-6, mRNA 유전자 발현 결과는 黑蔘醱酵瓊玉膏 (BKF), 黑蔘瓊玉膏 (BK), 人蔘醱酵瓊玉膏 KF), 人蔘瓊玉膏 (K1) 순으로 낮았다. 염증 싸이토카인 IL-6와 TNF-α 생산량 발현 분석에서도 黑蔘醱酵瓊玉膏 (BKF), 黑蔘瓊玉膏 (BK), 人蔘醱酵瓊玉膏 (KF), 人蔘瓊玉膏 (K1) 순으로 낮았다. 이와 같이 黑蔘醱酵瓊玉膏 (BKF), 黑蔘瓊玉膏 (BK), 人蔘醱酵瓊玉膏 (KF), 人蔘瓊玉膏 (K1) 순으로 항산화 및 항염증 작용이 증가되었음을 확인하였다.
이와 같이 黑蔘醱酵瓊玉膏 (BKF)가 항산화 및 항염 작용에서 가장 우수하였으며 특히 黑蔘醱酵瓊玉膏 (BKF)는 천연 자연물질로서 안전하고 천연 항산화와 항염증 작용을 하고 있다. 향후 제조의 편리성과 효율성을 갖춘 직접 멘틀 방식의 黑蔘醱酵瓊玉膏가 질병의 예방 및 치료제로 이용되길 기대한다.

주제어 : 瓊玉膏, 黑蔘醱酵瓊玉膏, 직접 히팅맨틀 방식 瓊玉膏 항산화, 항염증작용.

목차

목 차
I. 서 론 1
II. 재료 및 방법 3
1. 재료 3
1.1 약재 및 시료 제조 3
1.1.1 약재 3
1.1.2 시료 제조 3
1.2 시약 5
1.3 기기 5
2. 방법 6
2.1 DPPH 라디칼 소거능에 의한 항산화 활성 6
2.2 RAW264.74 세포주에서 항염에 미치는 효과 7
2.2.1 세포주 및 세포배양 7
2.2.2 세포 독성(cytotoxicity) 측정 7
2.2.3 대식세포 배양 및 NO 측정용 시료의 배양 7
2.2.4 Nitric Oxide (NO) 생성량 측정 8
2.2.5 세포 내 reactive oxygen species(ROS) 분석 8
2.2.6 ELISA 측정 분석 8
2.2.7 Real-time PCR을 통한 유전자 발현 분석 9
2.2.7.1 RNA 추출 9
2.2.7.2 역전사 (reverse transcription) 10
2.2.7.3 Real-time quantitative PCR 10
3. 통계분석 11
Ⅲ. 실험 결과 12
1.1 세포독성 12
1.2 DPPH 라디칼 소거능에 의한 항산화 활성 13
1.3 RAW 264.7 세포주에서 항산화 측정 14
1.3.1 NO 생성량 측정 14
1.3.2 ROS 생성량 측정 15
1.4 Quantitative Real Time PCR을 이용한 염증 싸이토카인 유전자 발현 분석 16
1.4.1 Pro-inflammatory NOS-II mRNA 유전자 분석 16
1.4.2 Pro-inflammatory COX-2 mRNA 유전자 분석 17
1.4.3 Pro-inflammatory IL-1β mRNA 유전자 분석 18
1.4.4 Pro-inflammatory IL-6 mRNA 유전자 분석 19
1.4.5 Pro-inflammatory TNF-α mRNA 유전자 분석 20
1.5 염증싸이토카인 IL-6와 TNF-α 생산량 발현 분석 21
1.5.1 Pro-inflammatory IL-6 생산량 분석 21
1.5.2 Pro-inflammatory TNF-α 생산량 분석 22
Ⅳ. 고 찰 23
Ⅴ. 결 론 30
Ⅵ. 참고문헌 32
ABSTRACT 35

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