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논문 기본 정보
- 자료유형
- 학위논문
- 저자정보
- 지도교수
- 박용남
- 발행연도
- 2017
- 저작권
- 한국교원대학교 논문은 저작권에 의해 보호받습니다.
이용수26
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본 연구에서는 한국인 암환자의 혈청 중에 있는 셀레노 단백질을 정확하게 분리하고 정량한 후 암의 진행 과정과 셀레노 단백질의 함량에 대한 상관관계를 살펴보았다.
셀레노 단백질은 AF-HPLC를 이용하여 크게 글루타티온 과산화효소 (Glutathione Peroxidase ; GPx), 셀레노 프로테인 (Selenoprotein P ; SelP), 셀레노 알부민 (Selelnoalbumin ; SeAlb)로 분리 할 수 있다. 선행 연구에서 셀레노 단백질의 분리를 위해 이동상으로 ammonium acetate를 사용하였다. 그러나 바탕값이 높아지면서 피크에 대한 간섭이 발생하였다. 본 연구에서는 이동상을 ammonium nitrate로 바꾸여 이러한 현상을 해결하였고 오차를 감소시킬 수 있었다.
실험에 사용한 혈청은 전처리 과정 없이 0.45 ㎛ 필터를 이용하여 걸렀다. Heparin-Sehparose(HEP) 과 Blue-Sehparose(BLUE) 컬럼을 ICP/MS에 온라인으로 연결하여 GPx와 SelP 및 SeAlb을 분리 하였고 각 단백질의 농도는 혈청 내에 존재하는 Br 간섭 요인을 배제시키기 위해 m/z 77과 78의 비를 이용하였다. 통제군으로 순환기 질환 환자들의 혈청을 사용하였다.
Human serum CRM을 이용하여 측정하였을 때, BCR-637(81 ± 7 ng?g-1)에서 전체 셀레노 단백질의 농도 73.82 ± 3.84 ng?g-1로 8.87 %의 오차율을 보였고, BCR-639(133 ± 12 ng?g-1)에서는 106.91 ± 2.85 ng?g-1로 19.61%의 오차율을 보였다. 위암 환자의 종별 셀레노 단백질의 함량은 GPx 18.12 ± 1.14 ng?g-1, SelP 27.05 ± 2.00 ng?g-1, SeAlb 15.10 ± 0.92 ng?g-1이고, 통제군인 순환기 질환 환자들은 GPx 23.72 ± 11.91 ng?g-1, SelP 47.49 ± 17.44 ng?g-1, SeAlb 19.34 ± 21.84 ng?g-1의 분포를 가지고 있다. 전체 셀레노 단백질의 농도는 위암 환자가(60.26 ± 3.00 ng?g-1) 순환기 질환 환자(90.56 ± 21.72 ng?g-1)에 비해 낮게 나타났다. 암 진행 단계에 따른 농도를 비교해 보면, 1기 위암 환자의 체내 전체 셀레노 단백질의 함량은 62.62 ± 11.61 ng?g-1로 4기 위암 환자의 체내 전체 셀레노 단백질의 함량인 56.89 ± 16.64 ng?g-1 보다 높게 나타난 것을 볼 수 있었다.
셀레노 단백질은 AF-HPLC를 이용하여 크게 글루타티온 과산화효소 (Glutathione Peroxidase ; GPx), 셀레노 프로테인 (Selenoprotein P ; SelP), 셀레노 알부민 (Selelnoalbumin ; SeAlb)로 분리 할 수 있다. 선행 연구에서 셀레노 단백질의 분리를 위해 이동상으로 ammonium acetate를 사용하였다. 그러나 바탕값이 높아지면서 피크에 대한 간섭이 발생하였다. 본 연구에서는 이동상을 ammonium nitrate로 바꾸여 이러한 현상을 해결하였고 오차를 감소시킬 수 있었다.
실험에 사용한 혈청은 전처리 과정 없이 0.45 ㎛ 필터를 이용하여 걸렀다. Heparin-Sehparose(HEP) 과 Blue-Sehparose(BLUE) 컬럼을 ICP/MS에 온라인으로 연결하여 GPx와 SelP 및 SeAlb을 분리 하였고 각 단백질의 농도는 혈청 내에 존재하는 Br 간섭 요인을 배제시키기 위해 m/z 77과 78의 비를 이용하였다. 통제군으로 순환기 질환 환자들의 혈청을 사용하였다.
Human serum CRM을 이용하여 측정하였을 때, BCR-637(81 ± 7 ng?g-1)에서 전체 셀레노 단백질의 농도 73.82 ± 3.84 ng?g-1로 8.87 %의 오차율을 보였고, BCR-639(133 ± 12 ng?g-1)에서는 106.91 ± 2.85 ng?g-1로 19.61%의 오차율을 보였다. 위암 환자의 종별 셀레노 단백질의 함량은 GPx 18.12 ± 1.14 ng?g-1, SelP 27.05 ± 2.00 ng?g-1, SeAlb 15.10 ± 0.92 ng?g-1이고, 통제군인 순환기 질환 환자들은 GPx 23.72 ± 11.91 ng?g-1, SelP 47.49 ± 17.44 ng?g-1, SeAlb 19.34 ± 21.84 ng?g-1의 분포를 가지고 있다. 전체 셀레노 단백질의 농도는 위암 환자가(60.26 ± 3.00 ng?g-1) 순환기 질환 환자(90.56 ± 21.72 ng?g-1)에 비해 낮게 나타났다. 암 진행 단계에 따른 농도를 비교해 보면, 1기 위암 환자의 체내 전체 셀레노 단백질의 함량은 62.62 ± 11.61 ng?g-1로 4기 위암 환자의 체내 전체 셀레노 단백질의 함량인 56.89 ± 16.64 ng?g-1 보다 높게 나타난 것을 볼 수 있었다.
목차
I. 서론 11. 연구의 필요성 및 목적 12. 연구 문제 43. 이론적 배경 5II. 실험 91. 기기 92. 시약 및 시료 103. 시료의 전처리 124. 기기의 최적조건 125. 실험 과정 14II. 결과 및 논의 211. 이동상에 의한 정량 방해 요소 제거 및 정확도 확인 21(1) ammonium acetate의 의한 영향 21(2) ammonium nitrate를 이동상으로 사용하였을 때의 바탕값 24(3) Human serum CRM을 이용한 정확도 확인 292. 셀레노 단백질과 암과의 상관관계 31(1) 통제군(순환기 질환 환자)의 셀레노 단백질의 분리 및 정량 31(2) 위암 환자의 셀레노 단백질의 분리 및 정량 35IV. 결론 및 제언 41V. 참고문헌 43Ⅵ. 부록 49
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