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논문 기본 정보
- 자료유형
- 학위논문
- 저자정보
- 발행연도
- 2016
- 저작권
- 동의대학교 논문은 저작권에 의해 보호받습니다.
이용수4
이 논문의 연구 히스토리 (2)
2016
Cytoprotective effect of ganoderma lucidum ethanol extract against oxidative stress in C2C12 myoblasts through upregulation of Nrf2/HO-1 pathway
이유환
한의학과
2016.01
학위논문
Ethanol Extract of Ganoderma lucidum Augments Cellular Anti-oxidant Defense through Activation of Nrf2/HO-1
이유환
,
김정희
,
송춘호
외 5명
Journal of Pharmacopuncture
2016.01
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영지 버섯의 항산화 효능에 대한 연구는 일부 보고된 바 있으나, 그에 대한 자세한 분자생물학적 기전연구는 여전히 미흡한 실정이다. 본 연구에서는 근 기능 강화 천연물 탐색 과정의 일환으로 산화적 스트레스에 대한 영지 버섯 에탄올 추출물(G. lucidum ethanol extract, EGL)의 보호 효과와 그에 따른 기전을 C2C12 근아세포를 대상으로 조사하였다. 산화적 스트레스 유발을 위하여 과산화수소(hydrogen peroxide, H2O2)를 사용하였으며, EGL을 선처리하였을 경우, H2O2의 처리에 의한 C2C12 근아세포 증식억제를 유의적으로 차단하였으며, 이는 활성산소종(reactive oxygen species, ROS) 생성의 억제와 연관성이 있었다. 또한 H2O2가 처리된 C2C12 근아세포에서 관찰되는 대표적인 DNA 손상 biomarker인 comet-like DNA 형성과 γH2AX 단백질의 인산화도 EGL의 선처리에 의하여 효과적으로 억제되었으며, 이는 전체적인 세포 형태 변형의 보호 효능과 동일한 경향성임을 알 수 있었다. 그리고 EGL은 C2C12 근아세포에서 대표적인 전사활성 인자인 nuclear factor erythroid 2-related factor 2 (Nrf2)의 발현을 유의적으로 증가시켰다. 아울러 Nrf2에 의하여 전사활성이 조절되는 heme oxygenase-1 (HO-1)의 발현도 EGL의 처리에 의하여 증가되었으며, 이는 Nrf2의 인산화 증가와 핵 내로의 이동성 향상과 연계되었음을 알 수 있었다. 또한 EGL에 의한 HO-1의 발현 증가와 산화적 스트레스 보호 효능과의 직접적인 연관성을 조사하여 위하여 HO-1 활성 특징적 억제제인 zinc protoporphyrin IX을 처리하였을 경우, H2O2에 대한 EGL의 ROS 생성 억제 효능과 세포 생존 저해에 대한 보호 효과가 사라져, EGL에 의한 HO-1의 발현 증가가 산화적 스트레스를 보호하기 위한 핵심적인 요소로 작용할 수 있음을 확인하였다. 그리고 Nrf2의 작용을 억제하기 위하여 Nrf2-specific small interfering RNA를 transfection한 C2C12 근아세포에서 EGL에 의한 HO-1 발현 증가가 억제되었으며, H2O2에 대한 세포 증식 보호 효과도 차단되었다. 이는 EGL의 산화적 스트레스 보호 효과에 핵심적인 역할을 하는 HO-1의 발현이 Nrf2에 의하여 조절되고 있음을 보여주는 결과이다.
목차
I. Introduction 1II. Materials and methods 41. Preparation of EGL 42. Cell culture 43. Cell viability assay and morphological imaging 44. Measurement of intracellular ROS 55. Comet assay (single cell gel electrophoresis) 66. Protein extraction and Western blot analysis 77. Small interfering RNA (siRNA) transfection 98. Statistical analysis 9III. Results 101. Effects of EGL on the cell viability in C2C12 myoblasts 102. Effects of EGL protecting C2C12 myoblasts against H2O2-Induced cytotoxicity 103. Effects of EGL decreasing H2O2-induced ROS production in C2C12 myoblasts 144. Effects of EGL preventing H2O2-induced DNA damage in C2C12 myoblasts 165. Effects of EGL promoting the expression of Nrf2 and HO-1 in C2C12 myoblasts 196. Effects of HO-1 induced by EGL protecting C2C12 myoblasts against H2O2-Induced damage 217. Effects of EGL enhancing the phosphorylation and nuclear translocation of Nrf2 in C2C12 myoblasts 238. Effects of EGL up-regulating HO-1 expression via Nrf2-dependent manner in C2C12 myoblasts 25IV. Discussion 28V. Conclusion 33References 34Abstract 41
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