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논문 기본 정보

자료유형
학위논문
저자정보

이지연 (강원대학교, 강원대학교 일반대학원)

지도교수
이성진
발행연도
2015
저작권
강원대학교 논문은 저작권에 의해 보호받습니다.

이용수4

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이 논문의 연구 히스토리 (2)

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한국 재래닭 종자는 일제강점기와 한국전쟁을 겪고 산업화 과정을 거치면서 외래 수입종으로 대체되면서 멸실 위기를 맞았다. 재래닭은 콜라겐 성분이 많아 육질이 쫄깃하며 닭고기의 풍미를 결정하는 Methionine과 Cystine 등 황 아미노산이 풍부하여 기호성이 좋지만 외래종에 비해 생산성이 낮아 외래 도입종으로 대체되면서 수가 급격히 감소되었다. 이에 따라 축산과학원은 닭 종자의 개발을 위하여 1992년부터 전국 각지에 흩어져 사육되어 오던 재래닭을 수집하여 기초계를 조성하고 고유특성에 따른 순수계통을 육성하면서 재래닭 복원을 수행하여 왔다. 최근 축산물 안전성이 대두되면서 재래종의 선호도가 외래종보다 높아지는 추세이며 전 세계적으로 재래가축 유전자원의 중요성이 부각되면서 재래닭의 생산 능력 개량이 절대적으로 필요한 실정이다. Ovocalyxin-32 (OCX-32)는 조류의 난각 형성 마지막 단계에서 자궁액 내 높은 수준으로 존재하여 난각을 형성해 배아 항균작용에 있어 중요한 유전자로 알려져 있다. 가금에서 OCX-32 유전자의 단일염기변이는 산란 및 계란형질에 연관을 가지고 있는 것으로 보고되어 있다. 본 연구는 한국 재래닭의 산란형질 개선을 위한 후보유전자로 OCX-32 유전자를 선발하였고, OCX-32 유전자 내 변이와 재래닭 산란형질과의 연관성 분석을 위해 실시되었다. 국립축산과학원으로부터 산란형질(시산일령, 시산난중, 난중, 산란율)을 보유한 총 4종의 한국 재래닭(오골계, 흑계, 재계, 백계)을 공시 받았으며, PCR-RFLP 방법을 통해 c.494A>C 및 c.267T>G SNP의 genotype을 분석하였다. c.494A>C SNP은 오골계의 산란율(p<0.05)과 백계의 난중(p<0.05)에서 각각 유의적인 연관성이 나타났으며 c.267T>G SNP은 오골계의 난중과 유의적인 상관관계(p<0.05)가 있었다. 그 후 OCX-32 유전자 내 변이에 대한 추가 실험을 위해 targeted sequencing 기법으로 한국 재래닭과 산란형질과의 연관성을 분석하였다. 733 bp 이내의 범위에서 16개의 SNP과 5개의 INDEL을 발굴하였으며 그 중 5개의 SNP (1179T>A, 1183A>G, 1337A>G, 1347A>T, 1500A>C)과 4개의 INDEL (913 del A, ins CTT, ins TTC, 1360 del T)은 새로 발견되었다. 한국 재래닭 OCX-32 유전자 내 총 16개의 SNP 중 13개의 SNP (1025A>G, 1052G>A, 1078T>C, 1125C>G, 1179T>A, 1183A>G, 1201G>A, 1209T>A, 1242G>A, 1347A>T, 1422G>T, 1451T>A, 1500A>C)과 5개의 INDE 중 2개의 INDEL (ins TTC, ins TCT)에서 산란형질과의 유의적인 상관관계가 나타났다(p<0.05). 본 연구 결과, OCX-32 유전자 내 변이는 한국 재래닭의 산란 특성에 따른 품질 개량을 위한 DNA 선발 마커로서 이용가치가 높을 것으로 예상되며, 재래닭과 관련된 분자유전학적 연구의 기초자료가 될 것이라 사료된다.

목차

Ⅰ. 서 론 1
Ⅱ. 연구사 3
1. 한국 재래닭의 기원 3
2. 한국 재래닭의 특징과 보존의 필요성 4
3. 한국 재래닭의 형질개량 방법 6
1) 전통적인 개량방법 6
2) 분자유전학적 개량방법 6
4. DNA 표지인자 7
1) 초위성체 유전자(microsatellite, MS) 7
2) 단일염기다형성(Single nucleotide polymorphism, SNP) 8
3) 복제수변이(Copy number varivation, CNV) 8
5. 유전자형 분석방법 10
1) Restriction fragment length polymorphism (RFLP) 10
2) Single strand conformation polymorphism (SSCP) 10
3) DNA sequencing 11
Ⅲ. 재료 및 방법 13
1. 공시재료 및 산란형질 측정 13
1) 공시재료 13
2) 산란형질 조사항목 13
2. genomic DNA 분리 및 정제 14
3. PCR-RFLP 15
1) Primer 제작 15
2) PCR 증폭 15
3) 유전자형 분석 16
4. DNA Targeted sequencing 17
1) PCR 증폭 17
2) DNA 염기서열 및 유전자형 분석 18
5. 통계분석 19
Ⅳ. 결 과 20
1. 한국 재래닭의 산란형질 관측치 20
2. PCR-RFLP 21
1) 한국 재래닭 OCX-32 유전자 내 SNP c.494A>C 및 c.267T>G의 유전자형 분석 21
2) 한국 재래닭 OCX-32 유전자 내 SNP c.494A>C 및 c.267T>G 와 산란형질과의 유의성 분석 22
3. DNA targeted sequencing 24
1) 한국 재래닭 OCX-32 유전자 내 21개 SNP의 염기서열 및 유전자형 분석 24
2) 한국 재래닭 OCX-32 유전자 내 21개 SNP과 산란형질과의 유의성 분석 결과 27
Ⅴ. 고 찰 31
Ⅵ. 참고문헌 33

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