들깻잎(Perilla frutescens leaves)으로부터 U937과 SK-HEP-1 세포에 대해 apoptosis를 유도하는 광과민성 물질의 분리 및 구조동정 :

하준영

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자료유형: 학위논문

저자정보: 하준영 (부산대학교, 부산대학교 대학원)

지도교수: 김근기

발행연도: 2015

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2015

들깻잎(Perilla frutescens leaves)으로부터 U937과 SK-HEP-1 세포에 대해 apoptosis를 유도하는 광과민성 물질의 분리 및 구조동정

하준영 생명환경화학과 2015.01 학위논문

들깻잎(Perilla frutescens)으로부터 U937 세포에 apoptosis를 유도하는 광과민성 물질의 분리 및 구조동정

하준영 , 김미경 , 이준영 외 5명 생명과학회지 2015.01 학술저널

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In this study, we tried to separate the photosensitizer that induces apoptosis of leukemia cells (U937) and liver cancer cells (SK-HEP-1) from the perilla leaves. The perilla leaves (Perilla frutescens Britt var. japonica Hara) are popular vegetable in Korea, riched in vitamins(A and E), GABA and minerals. Dried perilla leaves extracted with methanol to separate the photosensitizer as various chromatographic techniques. The structure of the isolated compound (PL9443, PL2536, PL2539) was identified by 1D-NMR, 2D-NMR and FAB-mass spectroscopy. PL9443 compound was determined to be pheophorbide a ethyl ester having a molecular weight of 620. PL2539 compound was determined to be pheophorbide a methyl ester having a molecular weight of 606. It was identified as a derivative compound of pheophorbide structure that magnesium comes away from porphyrin ring. The structure of the isolated PL2536 and PL2539 compounds were identifying by 1D-NMR, 2D-NMR and FAB-mass spectroscopy. Observation of morphological changes in U937 and SK-HEP-1 cells following cell death induced by treated PL9443, PL2536, PL2539 compound reveled representative phenomena of apoptosis only in the light irradiation conditions (apoptotic body, vesicle formation). Also, this compound have caspase-3/7 activity when treated at a concentration of 0.25㎍/ml in U937 cells and SK-HEP-1 cells. Cytotoxicity appeared concentration dependent only in the light irradiation condition. The result of the electrophoresis was that DNA ladder formed by the PL9443, PL2536, PL2539 compound. The PL9443, PL2536, PL2539 compound is promising lead compounds as photosensitizers for photodynamic therapy of cancer.

#Apoptosis #Perilla frutescens #photosensitizer #Photodynamic therpy #U937 #SK-HEP-1

Ⅰ. 서론 1
Ⅱ. 재료 및 방법 6
1. 실험재료 6
1.1. 시약 및 기기 6
1.2. 세포주 7
2. 실험방법 8
2.1. 물질추출 8
2.2. 세포배양 8
2.3. 세포의 형태변화 9
2.4. 광과민성 물질의 순수분리 10
2.5. 광과민성 물질의 구조동정 12
2.5.1. UV spectrum 12
2.5.2. HPLC 12
2.5.3. NMR 13
2.6. Caspase assay 14
2.7. Cell viability assay 15
2.8. DNA fragmentation 16
Ⅲ. 결과 및 고찰 17
1. 용매추출물의 세포독성 17
2. 광과민성 물질의 순수분리 18
3. 광과민성 물질의 구조동정 20
3.1. UV spectrum 20
3.2. HPLC 22
3.3. NMR 24
4. 세포의 형태변화 45
5. Caspase-3/7 assay 48
6. Cell viability assay 56
7. DNA fragmentation 64
Ⅳ. 결론 67
Ⅴ. 참고문헌 71
Abstract 78

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