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논문 기본 정보

자료유형
학위논문
저자정보

Chanutchamon Sutthiwanjampa (강릉원주대학교, 강릉원주대학교 일반대학원)

지도교수
Sang Moo Kim
발행연도
2014
저작권
강릉원주대학교 논문은 저작권에 의해 보호받습니다.

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이 논문의 연구 히스토리 (2)

2014

Production and Characterization of Hyaluronidase and Elastase Inhibitory Protein Hydrolysates from Venus Clam (Gomphina melanaegis)
Chanutchamon Sutthiwanjampa ,  Sang Moo Kim 한국식품영양과학회 학술대회발표집 2014.10 학술대회자료
Biofunctional Activity of Enzymatic Venus Clam (Gomphina melanaegis) Hydrolysates : 민들조개(Gomphina melanaegis)가수분해물의 생리활성
Chanutchamon Sutthiwanjampa 해양응용생명공 2014.01 학위논문

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5종의 단백질 효소를 이용한 민들조개와 자숙민들조개의 가수분해는 반응표면분석법에 의해 최적화 하였다. Alcalase 가수분해물은 가장 강한 hyaluronidase 저해활성을 나타내었다. 민들조개의 최적가수분해 조건은 E/S비 2.15% (v/w), 가수분해시간 150 min, W/S비는 83.84 mL/g (v/w)로 나타났고, 자숙민들조개의 최적가수분해조건은 E/S비 2.02% (v/w), 가수분해시간 4.11 h, W/S비는 69.74 mL/g (v/w)로 나타났다. 민들조개와 자숙민들조개의 가수분해물은 S-200HR size exclusion chromatography에 의해 분획하였으며, 각각 하나(FH1)와 두개(BH1과 BH2)로 분획되었다. FH1, BH1그리고 BH2의 분자량은 각각26.5, 26.1그리고10.6 kDa이였다. BH1은 가장높은 hyaluronidase, elastase 저해활성을 보였으며, 활성도는 141.15, 81.36 %?mL/mg 이였다.
BH1의 강한 hyaluronidase, elastase 저해활성을 통해 자숙 민들조개의 가수분해 분획물(BH1)의 아미노산 조성과 생물학적 활성(항산화, tyrosinase 저해, 면역조절 활성)을 측정하였다. BH1은Glycine, Glutamic acid, Aspartic acid, Threonine, Alanine, Serine, Proline, Valine 과 Leucine이 많았고 전체 아미노산의 각각14.1, 12.8, 10.2, 8.7, 8.0, 8.0, 7.5, 7.2 그리고 5.3%를 차지하였다. BH1 항산화활성의 IC50 값은: DPPH 소거 활성, 201.11 ?g/mL; hydrogen peroxide radical 소거 활성, 424.61 ?g/mL; hydrogen peroxide radical 소거 활성, 66.78 ?g/mL, superoxide radical 소거 활성은 500 ?g/mL의 농도에서 13.56%의 저해활성을 나타내었으며, 양성대조군은 L-ascorbic acid을 이용하여 비교하였다. BH1의 tyrosinase 저해활성의 IC50 값은 458.54 ?g/mL 대조군은 Kojic acid 이용하여 비교하였으며, 게다가 RAW 264.7 cell로부터 NO와 다른 cytokines의 분비를 증가시켜 면역활성이 우수할 것으로 보인다. 이러한 결과는 BH1이 항산화제, tyrosinase 저해제 및 면역 조절물질로 이용할 수 있을 것으로 사료된다.
따라서 자숙 민들조개 가수분해물의 생물학적 활성(항산화, hyaluronidase저해, elastase저해, tyrosinase저해, 면역조절)을 가지고 있어 잠재적인 제약원료와 화장품원료로서의 이용이 가능할 것으로 사료된다.

목차

List of Tables I
List of Figures . II
Acknowledgements . IV
요약 . V
Abstract . VII
Part I: Production and characterization of hyaluronidase and elastase inhibitory protein hydrolysates from Venus clam (Gomphina melanaegis)
1. Introduction . 9
2. Materials and methods . 11
2.1. Materials 11
2.2. Methods . 11
2.2.1. Proximate compositions 11
2.2.2. Preparation of samples 12
2.2.3. Enzymatic hydrolysis of clams 12
2.2.4. Optimization of enzymatic hydrolysis 14
2.2.5. Determination of protein content 15
2.2.6. Determination of degree of hydrolysis 18
2.2.7. Fractionation of protein hydrolysates 18
2.2.8. Electrophoresis 19
2.2.9. Hyaluronidase inhibitory activity 19
2.2.10. Elastase inhibitory activity 20
2.2.11. Statistical analysis . 21
3. Results and discussion . 21
3.1. Proximate compositions 21
3.2. Hydrolysis of clam protein with different proteases 22
3.3. Optimization of enzymatic hydrolysis . 24
3.4. Fractionation of hyaluronidase and elastase inhibitory protein hydrolysates . 31
3.5. Hyaluronidase inhibitory activity 35
3.6. Elastase inhibitory activity 36
4. Conclusions 37
5. References 39
Part II: Antioxidant, tyrosinase inhibitory and immunomodulatory activity of Venus clam protein hydrolysates (Gomphina melanaegis) by Alcalase
1. Introduction . 45
2. Materials and methods . 47
2.1. Materials 47
2.2. Methods . 48
2.2.1. Preparation of sample 48
2.2.2. Determination of amino acid compositions . 48
2.2.3. Antioxidant activity 48
2.2.3.1. DPPH radical scavenging activity . 48
2.2.3.2. Superoxide anion radical scavenging activity . 49
2.2.3.3. Hydrogen peroxide radical scavenging activity 49
2.2.3.4. Hydroxyl radical scavenging activity 50
2.2.4. Tyrosinase inhibitory activity . 51
2.2.5. Immunomodulatory activity 51
2.2.5.1. Cell lines and culture . 51
2.2.5.2. Macrophage proliferation assay 52
2.2.5.3. Nitrite assay 52
2.2.5.4. Prostaglandin E2 assay 53
2.2.5.5. Reverse transcription-polymerase chain reaction(RT-PCR) . 54
2.2.6. Statistical analysis . 54
3. Results and discussion 56
3.1. Determination of amino acid compositions 56
3.2. Antioxidant activity . 58
3.2.1. DPPH radical scavenging activity . 58
3.2.2. Superoxide anion radical scavenging activity . 60
3.2.3. Hydrogen peroxide radical scavenging activity 61
3.2.4. Hydroxyl radical scavenging activity . 62
3.3. Tyrosinase inhibitory activity . 64
3.4. Immunomodulatory activity 66
4. Conclusions . 69
5. References . 73

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