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논문 기본 정보
- 자료유형
- 학위논문
- 저자정보
- 지도교수
- 홍진태
- 발행연도
- 2014
- 저작권
- 충북대학교 논문은 저작권에 의해 보호받습니다.
이용수11
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자외선 (UV)은 인간 정상 세포에서 많은 세포간 트랜스덕션 캐스케이드 (transduction cascade)에 손상을 줌으로써 분자 및 세포 구성 성분에 심각한 변화를 일으킨다. 비록 자외선에 대한 반응이 게놈 및 프로테옴 레벨에서 잘 설명이 되어왔지만, 자외선 방어 효과는 이 레벨에서 밝혀지지 않았다. 본 논문은 우방자로부터 분리한 악틴 (arctiin)이 마이크로 알엔에이 (miRNA) 발현 프로파일 (profiles)에 변화를 줌으로써 자외선 조사에 대한 방어효과를 나타낸다는 결과를 보여준다. 세포 독성 평가, 유세포 분석 (flow cytometry), 상처 회복 효과 (wound healing), DNA 손상 회복 효과 평가법을 통해 자외선 조사 전 악틴을 처리한 섬유아 세포에서 자외선에 의한 세포 사멸 (apoptosis), 세포 이동 감소 (cell migration), DNA 손상을 억제해주는 효과를 보여주었다. 또한, 악틴은 하켓 케라티노사이트 (HaCaT keratinocytes) 에서도 자외선 유도 세포 독성을 감소시키고 상처 치유 및 DNA 회복을 촉진시켜주었다. 악틴에 의해 유도된 자외선 방어 효과는 다양한 마이크로알엔에이 발현 프로파일과 관련이 깊은 것으로 확인되었으며, 바이오인포메틱스 분석에서는 감소된 마이크로 알엔에이들은 섬유아세포에서는 기능적으로 MAPK 신호전달 및 암 신호전달 과정에 관여를 하고 케라티노사이트에서는 암, 세포 주기 (cell cycle), 윈트 유전자 (Wnt) 와 MAPK 신호전달 패스웨이에 관여를 한다.
이러한 결과들은 우방자로부터 분리한 악틴이 섬유아세포와 케라티노사이트에서 특정한 마이크로 알엔에이 발현에 변화를 줌으로써 자외선에 의한 세포 손상을 방어하는 역할을 수행한다는 것을 보여주었으며 향후 노화 연구와 관련하여 마이크로 알엔에이 (miRNA) 가 피부 노화 연구의 새로운 타겟으로서 이용될 수 있음을 보여주었다.
이러한 결과들은 우방자로부터 분리한 악틴이 섬유아세포와 케라티노사이트에서 특정한 마이크로 알엔에이 발현에 변화를 줌으로써 자외선에 의한 세포 손상을 방어하는 역할을 수행한다는 것을 보여주었으며 향후 노화 연구와 관련하여 마이크로 알엔에이 (miRNA) 가 피부 노화 연구의 새로운 타겟으로서 이용될 수 있음을 보여주었다.
목차
I.INTRODUCTION 1II.MATERIAL AND METHODS 21Ⅱ-1.Study on the extraction condition and yield 21Ⅱ-2.Isolation and identification of arctiin from Arctium lappa seed 21Ⅱ-3.Selection of single compound 23Ⅱ-4.Cell culture 23Ⅱ-5.Cytotoxicity assay 25Ⅱ-6.UVB protection assay 25Ⅱ-7.Collagen assay 26Ⅱ-8.MMP-1 assay (Western blotting) 26Ⅱ-9.Analysis of cell cycle by flow cytometry 27Ⅱ-10.Wound healing assay 27Ⅱ-11.Luciferase-based DNA repair assay 28Ⅱ-12.Total RNA purification 28Ⅱ-13. Microarray analysis of miRNA expression 29Ⅱ-14. Bioinformatics analysis of dysregulated miRNAs 30Ⅱ-15. Statistical analysis 30III. RESULTS AND DISCUSSION 31Ⅲ-1. Isolation and identification of single compound from Arctium lappa seed 31Ⅲ-2. Study on the single compound extraction condition 38Ⅲ-2-1.Extraction yield of arctiin by the change of extraction condition 38Ⅲ-2-2.Selection of one active compound from repeatability and solubility test 38Ⅲ-2-3.Linearity test of arctiin 40Ⅲ-2-4.Establishment of optimal extraction process for arctiin 40Ⅲ-3.Protective effects of arctiin on UVB-induced NHDF damages through miRNA expression changes 47Ⅲ-3-1.Arctiin promotes UVB protection in NDHF cells 47Ⅲ-3-2.Arctiin recovers UVB-induced collagen decrease in NHDF cells 50Ⅲ-3-3.Arctiin decreases UVB-induced MMP-1 synthesis in NHDF cells 52Ⅲ-3-4.Arctiin rescues UVB-induced apoptosis in NHDF cells 54Ⅲ-3-5.Arctiin rescues UVB-mediated migration defects in NHDF cells 56Ⅲ-3-6.Arctiin promotes UVB-mediated DNA damage repair in NHDF cells 58Ⅲ-3-7.UVB protection effect of arctiin is associated with changes in the expression of specific miRNAs in NHDF cells 60Ⅲ-3-8.Differentially regulated miRNAs may play a role in regulating key pathways involved in the UVB protection effect in NHDF cells 64Ⅲ-3-9.Discussion 71Ⅲ-4.Photoprotective effect of arctiin against UVB-induced damage in HaCaT keratinocytes through miRNA expression changes 77Ⅲ-4-1.Arctiin protects HaCaT keratinocytes against UVB damages 77Ⅲ-4-2.Arctiin pretreatment antagonizes UVB-mediated HaCaT keratinocytes death 80Ⅲ-4-3.Arctiin pretreatment rescues UVB-induced deficiencies in wound healing and DNA repair 82Ⅲ-4-4.UVB protective functions of arctiin are associated with changes in miRNA expression profiles in HaCaT keratinocytes 86Ⅲ-4-5.Discussion 98IV.CONCLUSION 103
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