NF-κB 조절을 통한 충울자의 염증조절효과 :Leonuri Fructus ameliorates acute inflammation via the inhibition of NF-κB-mediated nitric oxide and pro-inflammatory cytokine production

박성규

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자료유형: 학위논문

저자정보: 박성규 (대구한의대학교, 대구한의대학교 대학원)

지도교수: 김상찬

발행연도: 2014

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이 논문의 연구 히스토리 (2)

2014

NF-κB 조절을 통한 충울자의 염증조절효과

박성규 한의학과 2014.01 학위논문

NF-${\kappa}B$ 조절(調節)을 통한 충울자(？蔚子)의 염증억제효과

박성규 , 제갈경환 , 정지윤 외 6명 동의생리병리학회지 2014.01 학술저널

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?蔚子 (Leonurus japonicus houtt.)는 甘微寒無毒하며, 心包, 肝에 주로 작용하며, 活血調經, 淸肝明目의 효능이 있어, 月經不調, 痛經, 經閉, 崩中帶下, 産後瘀血作痛, 肝熱頭痛, 目赤腫痛, 目生?膜을 치료한다. 본 연구에서는 충울자가 肝熱頭痛, 目赤腫痛을 치료할 수 있음을 근거로 하여 대식세포를 이용하여 ?蔚子의 에탄올 추출물 (LJE)의 항염증 작용을 평가하고자 하였다.
항염증 작용의 기전을 조사하기 위해, in vitro로 쥐의 대식세포계인 Raw 264.7 세포에서 lipopolysaccharide (LPS)로 유발된 nitric Oxide (NO)와 전염증 cytokine의 생성, inducible NO synthase, p-I-κBα 및 NF-κB의 발현에 대한 LJE의 효능을 평가하였으며, in vivo로 carageenan으로 유도된 rat의 족부종 및 조직검사를 통하여 항염증효과를 평가하였다.
?蔚子 에탄올 추출물 (LJE)은 Raw 264.7 세포에서 LPS에 의해 증가한 NO 생성을 억제하였으며, NO 생성에 관계되는 iNOS의 발현을 억제하고, LPS에 의해 유도된 염증성 cytokine류의 생성을 억제하였다. 또한 LJE는 LPS에 의해 활성화된 NF-κB 신호 네트워크와 MAPK의 인산화를 억제하며, carrageenan으로 유도된 실험동물의 발부종 억제 및 침윤 염증세포의 수적 감소를 나타내었다.
이러한 결과는 iNOS와 전염증 cytokine의 생성 감소가 NF-κB pathway를 경유함을 시사하며, LJE의 항염증 효과는 충울자를 활용한 염증반응조절제 개발의 가능성을 제시하고 있다.

Leonuri Fructus, a semen of Leonuri Herba, has been used for the treatment of menstrual disorders such as amenorrhea, dysmenorrhea and leukorrhea and for the remedy of hyperemia. The present study was conducted to evaluate the anti-inflammatory effects of the Leonuri Fructus extract (Leonurus japonicus Houtt. EtOH extract; LJE) in vivo and in vitro.
In vitro study, the MTT assay for cell viability was conducted to determine the non-cytotoxic concentration of LJE treatment in media. The levels of NO were measured with Griess reagent. Pro-inflammatory cytokines were detected by ELISA method. The inflammation-related proteins of this study were detected by Western blot. All dosages 1-30 ㎍/㎖ of LJE used in this study had no significant cytotoxicity. The cells were treated with 1 ㎍/㎖ of LPS 1 h before treating LJE. The increases of NO production and iNOS expression were detected in LPS-treated cells compared with control, but, LJE attenuated the increases of NO and iNOS. LPS can activate macrophages and lead to the massive production of pro-inflammatory cytokines from the cells. LJE reduced the production of TNF-α and IL-1β induced by LPS stimulation. In LPS-activated macrophage, NF-κB signaling is pivotal pathway in inflammatory process and MAPK is also important. LJE suppresses the signaling pathways of NF-κB and MAPKs in LPS-induced macrophage cells.
In vivo study, carrageenan-induced hind paw acute edematous inflammation rat model was used for evaluation of anti-inflammatory activity of LJE. LJE significantly inhibited the increases of hind paw swelling, skin thicknesses, inflammatory cell infiltrations and decreased the numbers of mast cell induced by carrageenan injection.
These results suggest that LJE has an anti-inflammatory therapeutic potential, which is mediated through modulating NF-κB activation and MAPK phosphorylation. Inhibition of the rat paw edema induced by carrageenan is considered as direct evidence that LJE may be a useful source to treat inflammation.

#Leonuri Fructus #inflammation #NF-κB #충울자

Ⅰ. 서론 1
Ⅱ. 재료 및 실험방법 3
1. 충울자 추출물 (LJE) 제조 3
2. 시약 및 기구 3
3. 세포 배양 4
4. 세포 생존율 측정 4
5. NO 생성량 측정 4
6. Cytokine과 PGE2 측정 5
7. Immunoblot analysis 5
8. 실험동물 및 처치 6
9. Paw edema의 유도 및 측정 7
10. 조직처리 7
11. 통계적 검증 8
Ⅲ. 결과 9
1. LJE의 NO 생성 저해능 9
2. LJE의 iNOS 발현 저해 12
3. LJE의 cytokine 생성 저해능 14
4. LJE의 p-I-κBα 및 NF-κB 단백질 발현 저해 17
5. LJE의 MAP Kinases 인산화 저해 21
6. LJE의 발부종 억제 22
7. LJE에 의한 조직학적 변화 24
Ⅳ. 고찰 30
Ⅴ. 결론 35
참고문헌 36
Abstract 42
국문초록 44

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