본 연구는 아토피성 피부염 동물 모델인 BALB/c 마우스 에서 아토피성 피부염의 임상적 지표 및 면역학적 기전을 알아보고 천연물질 소재인 black currant seed oil (BCSO)의 효능을 평가 하였다. 생후 5주령의 BALB/c 마우스를 6마리씩 4개 군으로 분류하여 아무런 처치를 하지 않은 정상군(N), 아토피성 피부염을 유발한 대조군(C), 아토피성 피부염 유발 후 0.1% tacrolimus 연고를 처치한 양성대조군(PC), 아토피성 피부염 유발 후 BCSO를 처치한 실험군(E)으로 나누었다. 아토피성 피부염의 유발을 위해 아세톤과 올리브 오일에 녹인 1% DNCB 용액 100㎕를 제모한 등 부위에 주 2회 도포하였고, 다음 1주일은 0.2% DNCB 용액을 주 2회 도포하였다. 시료 처치는 BCSO, tacrolimus 연고 0.1%를 각각 150㎕를 4주간, 주 5회 처치하였고, 시료 처치 기간 중 0.2% DNCB를 주 1회 추가적으로 도포하였다. 실험기간동안 사료, 음수, 체중 변동에는 유의성이 관찰되지 않았고, 아토피성 피부염 유발직후 마우스의 등 부위에 홍반, 부종, 가피, 찰과상 등이 관찰되었으며 시료 처치 2주차부터 호전되는 양상을 보이며 시료 처치 4주차에는 정상에 가까울 정도로 회복되었다. 긁는 횟수는 시료 처치 전에 비해 시료 처치 후에 대조군에서 증가하였고, 양성대조군과 실험군에서는 감소하였다. 경피수분손실량의 변화를 측정한 결과 시료 처치 4주 후 대조군에 비해 양성대조군, 실험군에서 유의하게 감소하였다(p<0.05). 홍반도의 변화를 측정한 결과 대조군에 비해 양성대조군, 실험군에서 유의하게 감소하였다(p<0.001). 혈청 내 IgE 레벨 변화결과 아토피성 피부염을 유발한 군에서 정상군에 비해 10이상 높은 수치를 보였고 시료 처치 4주후 대조군에 비해 양성대조군, 실험군에서 유의하게 감소하였다(p<0.001). 비장세포 내 INF-γ는 대조군에 비해 양성대조군, 실험군에서 유의성 있는 증가를 보였고(p<0.001), IL-4의 수준은 대조군에 비해 양성대조군에서 유의하게 감소하였고(p<0.001), 실험군에서는 감소하는 경향을 보였다. INF-γ/IL-4의 ratio 변화는 대조군에서 감소한 비율이 양성대조군, 실험군에서 증가하였다(p<0.05). 피부조직 병리학적 관찰을 위해 절제한 등 부위를 H&E 염색하여 표피의 두께 및 염증 세포 침윤을 관찰한 결과 대조군에 비해 양성대조군, 실험군에서 유의하게 감소하였다(p<0.001). Toluidine blue 염색을 하여 진피 내 mast cell의 개수를 관찰한 결과 대조군에 비해 양성대조군, 실험군에서 유의하게 감소하였다(p<0.05). 본 실험의 결과를 종합하여 보면 black currant seed oil은 피부에 안전성이 있으며, 아토피성 피부염의 면역학적 기전에 효과적으로 작용한 것으로 보여진다.
This study investigated the clinical parameters of atopic dermatitis and evaluated the effectiveness of black currant seed oil (BCSO) to atopic dermatitis using an animal model of BALB/c mice. Five-week-old BALB/c mice were divided into four groups: normal group (non-treated, N), control group (atopic dermatitis-induced, C), positive control group (Tacrolimus ointment-treated for atopic dermatitis, PC), experiment group (BCSO-treated for induced atopic dermatitis, E). Atopic dermatitis was induced by applying 100㎕ of 1% DNCB dissolved in acetone and olive oil to the treatment area twice a week. For 4 weeks, 150㎕ of BCSO and 0.1% tacrolimus ointment were applied to experiment group and positive control group, respectively, 5 times a week. In addition, DNCB (0.2%) was applied once a week during the rest of the experimental periods. During the experiment, no significant changes were observed in feed intake, water intake, and body weight. As a result of atopic dermatitis induction, erythema, edema, eschar, and scratching were observed. The symptoms of atopic dermatitis were improved after 2 weeks of the treatment and almost disappeared after 4 weeks. The frequencies of scratching increased in C and decreased in PC and E after treatment. Transepidermal water loss significantly decreased in E and PC compared to that in C after 4 weeks of the treatment (p<0.05). The erythema index also significantly decreased in E and PC compared to that in C (p<0.001). Serum IgE level in C was 10 times higher than that in N. After 4 weeks of the treatment, serum IgE level significantly decreased in PC and E compared to that in C (p<0.001). The INF-γ level of spleen cells in PC and E showed a significant increase compared to that of C (p<0.001). IL-4 level in PC and E decreased significantly more than that in C (p<0.05). In histological observation using H&E staining, the epidermal thickness and the degree of inflammatory cell infiltration increased in PC and E compared to C (p<0.001). The numbers of mast cells significantly decreased in PC and E compared to those in C (p<0.05). The results of this study indicated that black currant seed oil is safe for skin and can effectively stabilize skin by involving an immunological mechanism of atopic dermatitis.
1. 서론 12. 재료 및 방법 42.1 시약 및 기기 42.2 시료 52.3 실험동물 62.4 실험군 구성 72.5 아토피성 피부염 유발 및 시료 도포 82.6 음수량, 사료량, 체중 변동 및 사료효율 측정 92.7 행동학적(itching) 관찰 92.8 피부병변 육안관찰 92.9 기기를 이용한 분석 102.9.1 경피수분손실량(transepidermal water loss, TEWL) 측정 102.9.2 홍반도 측정 102.10 혈액학적 분석 112.10.1 혈액학적 면역지표치의 변화 측정을 위한 채혈 112.10.2 혈청 내 IgE 측정 112.11 비장세포 배양 및 cytokine 측정 122.11.1 비장세포 배양 122.11.2 Lymph node 내 cytokine 측정 122.12 피부조직 병리학적 관찰 132.12.1 Hematoxylin & Eosin(H&E) 염색 후 광학현미경 관찰 132.12.2 Toluidine blue 염색 후 광학현미경 관찰 132.13 통계처리 143. 연구결과 153.1 음수량, 사료량, 체중 변동 및 사료효율 측정 결과 153.2 행동학적(itching) 관찰 결과 173.3 피부병변 육안 관찰 결과 183.4 기기를 이용한 분석 결과 193.4.1 경피수분손실량(transepidermal water loss, TEWL) 결과 193.4.2 홍반도 측정 결과 203.5 혈액학적 분석 결과 213.5.1 혈청 내 IgE 수준 변화 213.6 비장세포 배양액 내 cytokine 측정 결과 223.6.1 비장세포 증식 관찰 223.6.2 비장세포 내 INF-γ, IL-4 수준 223.6.3 비장세포 내 INF-γ vs IL-4 ratio 변화 233.7 피부조직 병리학적 관찰 결과 243.7.1 H&E 염색 후 광학현미경 관찰 결과 243.7.2 Toluidine blue 염색 후 광학현미경 관찰 결과 254. 고찰 26참고문헌 30부록 35영문초록 41국문초록 44