본 연구에서는 인공피부의 구축에 있어서 녹각교의 효과와 녹각교를 첨가함으로써 향상된 인공피부가 피부 독성도 검사에서 동물실험을 대체할 수 있음을 연구하는 것을 목적으로 한다. 인공피부의 구축에서 녹각교의 효과를 알아보기 위하여 H&E와 면역조직화학 염색을 수행하였다. H&E염색은 히알루론산을 첨가한 인공피부나 히알루론산과 녹각교를 함께 첨가한 인공피부가 대조군 보다 더 두꺼운 표피가 형성됨을 보여준다. 면역조직화학 염색은 히알루론산과 녹각교를 함께 첨가한 인공피부에서 p63이 표피의 기저층에서 발현되는 것을 보여준다. 또한involucrin 이 히알루론산과 녹각교를 함께 첨가한 인공피부에서 표피의 윗부분에 많이 발현됨을 관찰하였다. 게다가 히알루론산과 녹각교를 함께 첨가한 인공피부에서 기저막을 따라 α6-integrin과 β1- integrin이 강하게 발현됨과 진피의 type I collagen이 더 조밀하게 형성된 것을 관찰하였다. 히알루론산과 녹각교를 함께 첨가한 인공피부가 피부 독성도 검사에서 동물실험을 대체할 수 있음을 알아보기 위하여 히알루론산과 녹각교를 함께 첨가한 인공피부를 이용하여 피부 세포독성도 검사를 수행하였다. 도데실황산나트륨 (SDS) 또는 탄산나트륨을 히알루론산과 녹각교를 함께 첨가한 인공피부 위에 도포하였고 표피의 손상 정도를 H&E와 면역조직화학 염색을 통하여 평가하였다. H&E염색은 인공피부의 표피는 SDS와 탄산나트륨에 의해 농도 의존적으로 영향 받음을 보여주었다. 또한 이들 물질에 의하여 표피의 p63 발현이 감소하였다. 결론적으로 본 실험의 데이터는 녹각교가 인공피부의 구축에 있어서 표피와 기저막 및 세포외 기질의 형성에 기여함을 나타내고 있으며 녹각교는 인공피부의 구축에 유용한 보조제가 될 것임을 제안한다. 또한 히알루론산과 녹각교를 함께 첨가한 인공피부는 동물실험의 대체모델로서 사용될 수 있으며 생체 외 (in vitro) 독성도 검사 시험법의 발전에 도움을 줄 것으로 예상된다.
The aim of this study was to investigate the effects of Cervi cornus Colla (CCC) in the reconstruction of skin equivalent (SE) and to demonstrate that enhanced SE can replace animals for toxicity test. To examine the effects of CCC in the reconstruction of SE, H&E and Immunohistochemical staining were conduced. H&E staining showed that SE containing hyaluronic acid (HA) or HA&CCC had a thicker epidermis than the control SE. Immunohistochemical staining showed that p63 was mainly present at the basal layer of the epidermis in the HA&CCC model. Involucrin was obviously expressed in the upper layer of the epidermis in the HA&CCC model. Moreover, it was observed that α6- and β1- integrins were strongly expressed along the basement membrane zone in the HA&CCC model, in which the dermis expressing type I collagen was more compact. To find out that HA&CCC-enhanced SE can replace animals for toxicity test, it was tried to use it for cutaneous cytotoxicity test. Sodium dodecyl sulfate (SDS) or sodium carbonate was applied onto HA&CCC-enhanced SE and the epidermal damage was evaluated by H&E and immunohistochemical stains. H&E staining showed that SDS or sodium carbonate affected the epidermal part of HA&CCC-enhanced SE in a dose-dependent manner. Furthermore, the expression of p63 was decreased by SDS or sodium carbonate. In conclusion, the data indicate that CCC contributed to the formation of epidermis, basement membrane, and extracellular matrix in the reconstruction of SE and suggest that CCC may be a useful adjuvant in the reconstruction of SE. Also, HA&CCC-enhanced SE could be used for an alternative model of animal test and would be helpful for the development of in vitro toxicity assessment.
목차
Introduction 1Materials and Methods 5Results 9Discussion 20References 23국문초록 26Abstract 28