Regulation of ultraviolet (UV) radiation-induced cell death by cytosolic NADP+-dependent isocitrate dehydrogenase : NADP+-dependent cytosolic isocitrate dehydrogenase (IDPc) siRNA의 발현 억제에 의한 자외선 조사 시 세포 사멸의 증가 :

이수정

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자료유형: 학위논문

저자정보: 이수정 (경북대학교, 경북대학교 대학원)

지도교수: 박진우.

발행연도: 2013

저작권: 경북대학교 논문은 저작권에 의해 보호받습니다.

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이 논문의 연구 히스토리 (2)

2014

Enhancement of UVB radiation-mediated apoptosis by knockdown of cytosolic NADP+-dependent isocitrate dehydrogenase in HaCaT cells

이수정 , 박진우 BMB Reports 2014.01 학술저널

2013

Regulation of ultraviolet (UV) radiation-induced cell death by cytosolic NADP+-dependent isocitrate dehydrogenase : NADP+-dependent cytosolic isocitrate dehydrogenase (IDPc) siRNA의 발현 억제에 의한 자외선 조사 시 세포 사멸의 증가

이수정 생명과학부 2013.01 학위논문

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자외선은 태양에서 지구로 도달하는 전자기 스펙트럼의 일부로서 UVC (100-280 nm), UVB (280-320 nm), 그리고 UVA (320-400 nm)로 구분한다. 특히 UVB의 경우 직접적인 DNA 손상을 일으키고, 잠재적인 활성산소종의 유도인자로 작용한다. 활성산소종은 세포 수준의 손상을 증가시켜 세포사멸을 유도하고, 항산화물질을 통한 방어기작을 야기한다. 즉, 자외선에 노출되면 활성산소의 방출을 통해 피부염증, 피부암 등이 발생하게 되며, 이는 자외선이 환경적 발암물질로서 작용함을 의미한다. IDPc는 세포기질에서 NADPH 생성에 주된 효소로서 세포수준의 항산화 균형과 산화손상으로부터 세포를 보호한다고 알려져 있다. 따라서 IDPc의 활성을 억제한다면 자외선 조사로 생긴 initiated cell을 세포사멸로 유도하여 효과적으로 제거할 수 있을 것이라 예상하였다. IDPc siRNA를 처리한 HaCaT 세포에 자외선을 조사하였을 때, DNA가 절단되고 caspase의 활성이 증가하였으며, PARP와 caspase-3, -8, -9의 절단이 관찰되었다. 이는 UV에 의한 세포사멸은 IDPc siRNA를 삽입한 세포에서 더욱 증가하는 것을 의미한다. 또한 세포 내의 ROS 생성 정도의 증가와 미토콘드리아의 투과도의 변화를 관찰할 수 있었다. 실험 결과, IDPc가 세포 내의 산화 환원 상태와 산화 스트레스를 조절하고 IDPc siRNA를 통해 자외선 조사에 따른 세포사멸을 더 민감하게 유도할 수 있음을 알 수 있었다.

#UV #ROS #apoptosis #IDPc

Ⅰ. INTRODUCTION 1
1. UV radiation 1
2. Reactive oxygen species and antioxidative defence system 2
3. NADP+-dependent isocitrate dehydrogenase 4
Ⅱ. MATERIALS AND METHODS 6
1. Materials 6
2. Cell culture 7
3. Knockdown of IDPc by siRNA 7
4. RT-PCR analysis of IDPc 8
5. Measurement of IDPc activity 9
6. UVB irradiation 9
7. Western blot analysis 9
8. Fluorescence Activated Cell Sorting (FACS) analysis 10
9. DNA fragmentation assay 10
10. Caspase Activity assay 11
11. Cellular redox status 11
12. Mitocondrial redox status and damage 12
13. Quantitation of relative fluorescence 12
Ⅲ. RESULTS 13
1. Knockdown of IDPc by siRNA 13
2. Viability of IDPc siRNA-transfected HaCaT cells by UV irradiation 13
3. UV-induced apoptosis in IDPc transfected HaCaT cells 16
4. Modulation of the apoptotic marker proteins 18
5. Intracellular ROS level in HaCaT cells 23
6. Intracellular redox status 26
7. Effects of IDPc siRNA on mitochondrial damage 26
Ⅳ. DISCUSSION 30
Ⅴ. REFERENCES 34
Ⅵ. ABSTRACT IN KOREAN 39

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