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자료유형
학술저널
저자정보
Cho, Kyoung-Won (Department of Applied Biotechnology, Agricultural Plant Stress Research Center, and Biotechnology Research Institute, Chonnam National University) Torres Nilka Lineth (University of Panama, University Regional Center of Azuero, Province of Herrera, Panama) Subramanyam Subhashree (Department of Agronomy, Purdue University) Deepak Saligrama A (National Institute for Agro-Environmental Sciences) Sardesai Nagesh (Department of Biological Sciences, Purdue University, West Lafayette) Han, Ok-Soo (Department of Applied Biotechnology, Agricultural Plant Stress Research Center, and Biotechnology Research Institute, Chonnam National University) Williams Christie E. (Department of Entomology, Purdue University, West Lafayette) Ishii Hideo (National Institute for Agro-Environmental Sciences) Iwahashi Hitoshi (Human Stress Signal Research Center, National Institute of Advanced Industrial Science and Technology WEST) Rakwal Randeep (Human Stress Signal Research Center, National Institute of Advanced Industrial Science and Technology WEST)
저널정보
한국식물학회 식물학회지 식물학회지 제49권 제6호
발행연도
2006.1
수록면
413 - 420 (8page)

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Sample preparation in plant proteomics is tedious, requiring modifications depending on the type of tissue involved. Here, we describe a protein extraction protocol for both monocotyledonous (monocot) and dicotyledonous (dicot) species, which significantly improves the solubilization of total proteins. For example, we used the primary leaf tissue and seeds from rice, a cereal crop and genome model system. Total protein was first precipitated with trichloroacetic acid/acetone extraction buffer (TCAAEB) and subsequently solubilized with a modified O'Farrell lysis buffer (LB) containing thiourea and tris (LB-TT). Separation of total leaf proteins by two-dimensional gel electrophoresis (2-DGE) revealed improved solubilization, as determined by an increased number of spots detected with Coomassie brilliant blue (CBB) staining. In addition, the resolution was better than when LB-TT was used alone for protein extraction. Seed proteins could be extracted in LB-TT itself without the need for TCAAEB, which resulted in a highly insoluble precipitate. Our CBB-stained 2-D gel protein profiles also demonstrated the efficacy of this protocol for total protein extraction/solubilization from the dicot genome model (Arabidopsis), a dicot disease model (cucumber), and two other important monocot cereal crop models (maize and wheat). Moreover, this is the first report on generating a 2-D gel proteome profile for wheat crown and cucumber leaf tissues. Finally, as examples of proteome reference maps, we obtained silver nitrate-stained, large-format 2-D gels for rice leaf and wheat crown LB-TT solubilized proteins.
#Arabidopsis #cucumber #lysis buffer #maize #rice #wheat

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