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학술저널
저자정보
박충생 (경상대학교 축산학과) 전병균 (경상대학교 축산학과) 이효종 (경상대학교 수의학과) 최철민 (경상대학교 수의학과) 최상용 (경상대학교 수의학과)
저널정보
한국동물번식학회 한국수정란이식학회지 한국수정란이식학회지 제9권 제2호
발행연도
1994.1
수록면
153 - 160 (8page)

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This study evaluated the influence of cell stage of donor nucleus on nuclear injection, electrofusion and in vitro development in the rabbit to improve the efficiency of nuclear transplantation in the rabbit. The embryos of 8-, 16- and 32-cell stage were collected from the mated does by flushing viducts with Dulbecco's phosphate buffered saline(D-PBS) containing 10% fetal calf serum(FGS) at 44, 54 and 60 hours after hCG injection. The blastorneres separated from these embryos were used as donor nucleus. The ovulated oocytes collected at 14 hours after hCG injection were used as recipient cytoplasm following removing the nucleus and the first polar body. The separated blastomeres were injected into the enucleated oocytes by micromanipulation and were electrofused in 0.28 M mannitol solution at 1.5 kV /cm, 60 $\mu$sec for three times. The fused oocytes were cocultured with a monolayer of rabbit oviductal epithelial cells in M-199 solution containing 10% FGS for 72~120 hours at 39$^{\circ}C$ in a 5% $CO_2$ incubator. The cultured nuclear transplant embryos were stained with Hoechst 33342 solution and the number of cells were counted by fluorescence microscopy. The successful injection rate of 8-, 16- and 32-cell-stageblastomeres into enucleated oocytes was 86.7, 91.0 and 93.9%, respectively. The electrofusion rate of 8-, 16- and 32-cell-stage blastomeres with enucleated oocytes was 93.3,89.3 and 79.0%, respectively. Development of blastomeres to blastocyst was similar with 8-,16- and 32-cell-stage donor nuclei(26.2, 25.8 and 26.6%, respectively, P<0.05). The mean number of cell cycle per day during in vitro culture in nuclear transplant embryos which received 8-, 16- and 32-cell- stage nuclei was 1.87, 1.81 and 1.43, respectively.
#nuclear transplantation #cloned rabbit

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