The Optimal Condition of Performing MTT Assay for the Determination of Radiation Sensitivity

홍세미; 김일한

추천

검색

자료유형: 학술저널

저자정보: 홍세미 (서울대학교 의과대학 치료방사선과학교실) 김일한 (서울대학교 의과대학 치료방사선과학교실, 서울대학교 의학연구원 방사선의학연구소, 서울대학교 의과대학 암 연구소)

저널정보: 대한방사선종양학회 Radiation oncology journal : ROJ Radiation oncology journal : ROJ 제19권 제2호

발행연도: 2001.1

수록면: 163 - 170 (8page)

이용수

📌

연구주제

📖

연구배경

🔬

연구방법

🏆

연구결과

초록· 키워드

오류제보하기

목적 : 방사선조사후 세포의 생존 분획은 세포집락 측정기법으로 확인하는 것이 표준이나 많은 비용과 시간이 소요되는 단점을 갖고 있다. 이에 생존 세포의 tetrazolium염의 자색 formazan 침전물로의 환원시키는 능력에 그 기반을 둔 MTT 기법을 사용하여 세포집락 측정기법을 대체하기 위한 기법으로서의 유용성과 그 실행상의 최적조건을 규명하고자 하였다. 방법 : PCI-1, SNU-1066, NCI-H630, RKO등의 세포주에 0, 2, 4, 6, 8, 10 Gy의 방사선을 조사한 후 세포집락 측정 기법과 MTT기법으로 세포 생존 분획을 조사하였다. 세포집락 측정기법은 $25\;cm^2$ 폴리스티렌 배양 플라스크에 방사선량에 따라 다른 수의 세포를 분주한 후 24시간 동안 배양 후 방사선을 조사하였고 이를 $10\~14$일 동안 배양 후 염색하여 생성된 세포집락의 수를 측정하였다. MTT기법은 침전물의 용해과정이 필요없는 Premix WST-1 시약을 이용하여 시행하였다. MTT기법은 각각의 세포주에서 세포수와 흡광도간의 선형관계와 최적 실험조건을 확인한 이후 시행하였다. 이 기법은 방사선을 조사받은 세포에서는 지수적 성장을 회복한 이후와 방사선을 조사받지 않은 세포는 4회 이상의 세포분열을 거친 후에 시행하였다. 세포집락 측정기법 및 MTT기법을 통하여 얻은 세포 생존율을 구한 후 이를 지표로 비교하였다. 결과 : 각 기법으로 얻은 세포 생존율의 표준편차는 $5\%$ 내외였다. 2가지 방법으로 구한 세포 생존율은 t-test로 비교하였을 때 $0\~4\;Gy$에서는 통계적으로 유의한 차이가 없었으며 회귀분석 결과는 선형적 관계가 있었다$(R^2=0.975-0.992)$. MTT 기법의 시행에 최적인 세포수는 배양효율에 따라 다른 것으로 나타났는데, 배양효율이 $30\%$ 이상이면 300개 이하가, $30\%$ 미만인 경우는 $500\~1,000$개가 적당한 것으로 확인되었다. MTT기법은 6 배가시간 경과 이후에 시행하는 것이 세포집락 측정기법과 가장 근접하였으며 적어도 4 배가시간 이후에 시행하는 것이 필요할 것으로 사료되었다. 이에 따르면 배가시간이 3일 이하인 세포주가 세포 민감성 측정방법으로서 MTT 기법이 세포 집락 측정 기법을 대체하여 사용하기에 적합한 것으로 사료되었다. 결론 : 이상에서, MTT기법을 이용하여 방사선조사 후의 세포생존을 측정하기 위해서는 예비실험을 통해 각 세포주에서의 최적의 조건을 찾는 것이 필수적이며 이 조건하에서 MTT기법을 시행해야만 방사선에 의한 세포 민감성 측정에 이용될 수 있음을 확인하였다.

Purpose : The measurement of radiation survival using a clonogenic assay, the established standard, can be difficult and time consuming. In this study, We have used the MTT assay, based on the reduction of a tetrazolium salt to a purple formazan precipitate by living cells, as a substitution for clonogenic assay and have examined the optimal condition for performing this assay in determination of radiation sensitivity. Materials and Methods : Four human cancer cell lines - PCI-1, SNU-1066, NCI-H630 and RKO cells have been used. For each cell line, a clonogenic assay and a MTT assay using Premix WST-1 solution, which is one of the tetrazolium salts and does not require washing or solubilization of the precipitate were carried out after irradiation of 0, 2, 4, 6, 8, 10 Gy. For clonogenic assay, cells in $25\;cm^2$ flasks were irradiated after overnight incubation and the resultant colonies containing more than 50 cells were scored after culturing the cells for $10\~14$ days. For MTT assay, the relationship between absorbance and cell number, optimal seeding cell number, and optimal timing of assay was determined. Then, MTT assay was performed when the irradiated cells had regained exponential growth or when the non-irradiated cells had undergone four or more doubling times. Results : There was minimal variation in the values gained from these two methods with the standard deviation generally less than $5\%$, and there were no statistically significant differences between two methods according to t-test in low radiation dose (below 6 Gy). The regression analyses showed high linear correlation with the $R^2$ value of $0.975\~0.992$ between data from the two different methods. The optimal cell numbers for MTT assay were found to be dependent on plating efficiency of used cell line. Less than 300 cells/well were appropriate for cells with high plating efficiency (more than $30\%$). For cells with low plating efficiency (less than $30\%$), 500 cells/well or more were appropriate for assay. The optimal time for MTT assay was after 6 doubling times for the results compatible with those of clonogenic assay, at least after 4 doubling times was required for valid results. In consideration of practical limits of assay (12 days, in this study) cells with doubling time more than 3 days were inappropriate for application. Conclusion : In conclusion, it is found that MTT assay can successfully replace clonogenic assay of tested cancer cell lines after irradiation only if MTT assay was undertaken with optimal assay conditions that included plating efficiency of each cell line and doubling time at least.

#세포집락 측정기법 #방사선 감수성 #MTT법

참고문헌 (0)

참고문헌 신청

참고문헌이 DBpia에서 서비스 중이라면, [참고문헌 신청]을 통해 등록해보세요

함께 읽어보면 좋을 논문

논문 유사도에 따라 DBpia 가 추천하는 논문입니다. 함께 보면 좋을 연관 논문을 확인해보세요!

이 논문의 저자 정보

홍세미

소속기관 건국대학교 의과대학 방사선종양학과

주요연구분야 의약학 > 임상의학 > 방사선과학 의약학 > 임상의학 > 일반 외과학

논문수 9 이용수 40

김일한

소속기관 Department of Radiation Oncology, Seoul National University College of Medicine

주요연구분야 공학 > 재료·에너지공학 > 원자력공학 의약학 > 임상의학 > 방사선과학

논문수 67 이용수 92

최근 본 자료

전체보기

구분	그룹	데이터 항목
AI 학습용 데이터	원문	원문 PDF 파일
AI 학습용 데이터	원문 + 메타 (기본/상세)	원문 PDF 파일 및 서지정보 CSV
대량 구매용 데이터	B2B 구독 방식	특정 자료 한정으로 원문 접근 권한 부여
대량 구매용 데이터	URL 전달 방식	바로 PDF 뷰어를 열람할 수 있는 URL 제공

구분	그룹	데이터 항목
AI 학습용 데이터	기본 메타	발행기관명, 간행물명, 권호명, 권(vol), 호(issue), 통권, 발행연도, 발행월, 논문명, 저자명, 시작페이지, 종료페이지, 전체페이지, 상세페이지URL
상세 메타 데이터	발행기관 메타	발행기관 이명, 영문명, 창립연도, 홈페이지URL, 발행기관 소개
	간행물 메타	부제목, 간행물 유형, ISSN, ISBN, 최초발행연도, 폐간연도, 간행빈도, 발행주기, 등재사항, 이용수, 피인용수, 권호수, 논문수, 표지이미지
	논문 메타	작성 언어, 부제목, 대등제목, 목차, 키워드, 초록, 이미지, 참고문헌, 이용수, 피인용수, 논문활용도, DBpia통합주제분류, KDC분류, DDC분류, 한국연구재단분류, UCI, DOI
	저자 메타	소속기관, 소속부서, 직급, 연구분야, 연구키워드, 이용수, 피인용수, 저자 논문활용도

구분	그룹	데이터 항목
※ 결합형/맞춤형 메타 데이터는 신청 내용에 따라 다양하게 제공 가능
이용순위 정보	주제분야별 많이 이용된 논문	“인문학”에서 많이 이용된 논문 TOP100
	이용기관별 많이 이용된 논문	“중고등학교”에서 많이 이용된 논문 TOP100
	세부기관별 많이 이용된 논문	“서울대학교”에서 많이 이용된 논문 TOP100
	키워드별 많이 이용된 논문	“Chat GPT”에서 많이 이용된 논문 TOP100
키워드 정보	많이 이용된 키워드	특정기간/분야/저널 내 많이 이용된 키워드
	많이 발행된 키워드	특정기간/분야/저널 내 많이 발행된 키워드
	많이 검색된 키워드	특정기간/분야/저널 내 많이 검색된 키워드
	연구 트렌드 키워드	특정 키워드 연관 연구동향 분석 데이터 키워드

논문 기본 정보

초록· 키워드

AI 요약

연구주제

연구배경

연구방법

연구결과

주요내용

목차

참고문헌 (0)

함께 읽어보면 좋을 논문

이 논문의 저자 정보

최근 본 자료

댓글(0)