토끼 전핵배의 동결보존 후 배발달률

강다원; 조성근; 한재희; 곽대오; 이효종; 최상용; 박충생

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자료유형: 학술저널

저자정보: 강다원 (경상대학교 축산학과) 조성근 (경상대학교 축산학과) 한재희 (경상대학교 생물교육학과) 곽대오 (경상대학교 수의학과) 이효종 (경상대학교 의과대학) 최상용 (경상대학교 의과대) 박충생 (경상대학교 축산학과)

저널정보: 한국동물번식학회 한국동물번식학회지 한국동물번식학회지 제23권 제1호

발행연도: 1999.1

수록면: 75 - 84 (10page)

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연구결과

이 논문의 연구 히스토리 (3)

1999

토끼 전핵배의 동결보존 후 배발달률

강다원 , 조성근 , 한재희 외 4명 한국동물번식학회지 1999.01 학술저널

1998

토끼의 정상 및 핵이식배의 유리화 및 완만동결에 따른 융해 후 발달율

강다원 , 최창용 , 하란조 외 5명 한국수정란이식학회지 1998.01 학술저널

1997

유리화와 완만동결법에 의한 토끼 정상 및 핵이식배의 동결보존후 배발달율

강다원 , 강태영 , 최창용 외 6명 한국수정란이식학회 학술대회 1997.01 학술대회자료

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본 연구는 토끼 전핵배의 효율적인 생산을 위한 동결방법과 조건 등을 찾고자 유리화 동결 및 완만동결법으로 동결ㆍ융해 후 체외배양하여 생존율 및 발달률을 조사하였다. 과배란시킨 토끼의 난관으로부터 채란된 전핵배를 동결에 공시하였다. 유리화 동결은 동결보호제로 EFS 와 EPG-I을 완만동결시는 EPG-II를 사용하였다. 동결ㆍ융해 후 5%, 39$^{\circ}C$ $CO_2$incubator 에서 소 난관상피세포와 공배양하였다. 본 실험의 결과는 다음과 같다. 동결보존을 위하여 동결보호제에 적절한 평형시간과 독성 여부를 판단하기 위하여 전핵배를 EFS 용액에 0~5분간 평형시킨 후 부화배반포로의 발달률은 1 분 군에서 72.0%로 동결보호제에 노출시키지 않은 대조구 (84.1%)에 비하여 무해한 결과를 얻었으나, 그 이상에서는 유해한 결과를 보여 주었다. EFS 노출 후 희석제로 sucrose와 D-PBS를, sucrose 사용 없이 D-PBS 만으로 희석하였을 때 유의적인 (P＜0.05) 차이를 보이지 않았다. 동결보호제에 있어서는 독성검사 및 동결ㆍ융해 후 발달률을 보아 EFS, EPG-. EPG-II는 동결보존에 있어서 동결보호제로서의 가능성을 보여주었으며 서로간의 유의적인 (P＜0.05) 차이는 찾아볼 수 없었다. 유리화동결에 의한 전핵배의 부화배반포로 발달률은 6.1%를 나타내었고, 완만동결에 의한 부화배반포 발달률은 11.5%로서 동결방법간에는 유의적인 (P＜0.05) 차이가 없었다. 완만동결시 동결속도가 전핵배의 투명대 파열에 미치는 영향을 규명하기 위하여 동결속도 및 침지온도를 달리하여 조사하였을 때 －35$^{\circ}C$ (25%) 보다는 －85$^{\circ}C$ 0.9%) 에서 액체질소에 침지하였을 때가 투명대 파열률에 있어 유의적인 (P＜0.05) 차이를 보였다. 이상의 결과로부터 전핵배는 현 배양상태에서 유리화동결 및 완만동결에 의하여 동결보존이 가능하다고 사료되나 전핵배의 배반포로의 발달률은 다소 저조하였다. 유리화동결 및 완만동결에 의한 전핵배는 후기 단계의 수정란보다 물리적, 화학적 손상에 더욱 민감하여 생존율 및 발달률에 영향을 미친다고 사료된다.

This study assessed development in vitro of pronuclear(PN) stage embryos cryopreserved by the method of either vitrification or slow freezing, by using of different cryoprotectants, and equilibration and cooling rate, in rabbit. Ethyleneglycol- ficoll- sucrose(EFS) or ethyleneglycol- polyvinylpyrrolidone - galactose- (EPG-I) for vitrification, and EPG- II for slow freezing as cryoprotectant were used. The pronuclear embryos were exposed to EFS for 0 to 5 min and diluted with D-PBS and/or pre-dilution with 0.5 M sucrose. To examine the viability of frozen-thawed embryos, PN embryos were co-cultured with bovine oviductal epitherial cell(BOEC) for 5 days to hatching blastocyst stage in 39 $^{\circ}C$ 5% $CO_2$incubator. The results obtained were as follows: The dilution with 0.5 M sucrose and D-PBS after the exposure to EFS for 1.0 min resulted in no significant(P＜0.05) decrease in the development of PN embryos to hatching blastocyst(72.0%), compared with controls. The development of PN embryos cryopreserved to hatching blastocyst was not significantly (P＜0.05) different between EFS for 1.0 min(72.0%), EPG-I for 1.0 min(72.0%) and EPG-II for 30 min(66. 7%). The post-thaw development of PN embryos to hatching blastocyst was similarly very low as 6.1% and 11.5% in vitrification with EFS and slow freezing with EPG-II, respectively. The incidence of post-thaw zona-crack in PN embryos cryopreserved by slow freezing with plunging to liquid nitrogen at －35$^{\circ}C$ was signicantly(P＜0.05) higher(25.0%), compared with －85$^{\circ}C$ (1.9%). These results indicated that the rabbit PN embryos could be cryopreserved with either vitrification or slow freezing procedure, and frozen PN embryos could be successfully developed in vitro to haching blastocyst. but the post-thaw development of cryopreserved PN embryos was still very low under the present conditions.

#Pronuclear embryos #Vitrification #Slow freezing #Cryoprotectant

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주요연구분야 농수해양학 > 축산학

논문수 27 이용수 20

한재희

소속기관 경상대학교 의과대학 생리학교실, 경상대학교 건강과학연구원

주요연구분야 농수해양학 > 축산학

논문수 3 이용수 3

곽대오

소속기관 경상대학교

주요연구분야 농수해양학 > 축산학

논문수 20 이용수 24

Hyo-Jong Lee

소속기관 경상대학교 수의학과

주요연구분야 의약학 > 수의학 농수해양학 > 축산학

논문수 53 이용수 75

최상용

소속기관 경상대학교

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박충생

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논문수 82 이용수 140

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