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이번 연구에서는 중형저서동물의 생태학적 연구에 사용하는 Ludox와 Rose Bengal을 처리하였을 때, 고정액의 종류에 따른 DNA (mtCOI)의 추출 효율을 비교하고자 하였다. 실험을 위해 저서성 요각류 Tigriopus japonicus s.l.를 실험동물로 사용하였으며, 99% 에탄올과 4%포르말린의 두 종류의 고정액을 사용한 뒤 이들을 각각대조구로 삼았다. 그리고 (1) Ludox HS40, (2) Rose Bengal,(3) Ludox HS40+Rose Bengal을 각각 시료와 반응시킨뒤, mtCOI 유전자를 추출하였다. 이후 PCR을 진행하고산물을 전기영동하여 유전자의 증폭여부를 확인하였다.
또한 모든 실험은 30회 반복하여 실험간의 결과를 비교하였다. 그 결과, 에탄올의 경우에는 대조구를 포함한(1), (2), (3)의 실험 모두에서 96% 이상의 효율을 보였지만, 포르말린의 경우에는 대조구에서 27% 증폭되었으며,(1)과 (3)에서 약 3%, (2)에서 약 7%만 증폭되어 두 고정액에 따른 차이가 뚜렷하게 나타났다. 결과적으로 현재의 연구를 통해서 99% 에탄올이 중형저서동물에서DNA를 추출하는 데 적합한 고정액임을 확인하였다.
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참고문헌 (21)
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Alasaad S / 2008 / HotSHOT Plus ThermalSHOCK, a new and efficient technique for preparation of PCR-quality mite genomic DNA / Parasitology Research 103 : 1455 ~ 1457
Allander T / 2001 / A virus discovery method incorporating DNase treatment and its application to the identification of two bovine parvovirus species / Proceedings of the Nat
Avise JC / 1986 / Mitochondrial DNA and the evolutionary genetics of higher animals / Philosophical Transactions of the Royal Society B 312 : 325 ~ 342
Bhadury P / 2006 / Development and evaluation of a DNA-barcoding approach for the rapid identification of nematodes / MARINE ECOLOGY - PROGRESS SERIES 320 : 1 ~ 9
Blaxter M / 2005 / Defining operational taxonomic units using DNA barcode data / Philosophical Transactions of the Royal Society B 360 : 1935 ~ 1943
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