메뉴 건너뛰기
.. 내서재 .. 알림
소속 기관/학교 인증
인증하면 논문, 학술자료 등을  무료로 열람할 수 있어요.
한국대학교, 누리자동차, 시립도서관 등 나의 기관을 확인해보세요
(국내 대학 90% 이상 구독 중)
로그인 회원가입 고객센터 ENG
주제분류
인문학
인문학 일반 역사학 철학 종교학 어문학 기타 인문학
사회과학
사회과학 일반 경영학 관광학 교육학 군사학 문헌정보학 법학 사회학 신문방송학 심리과학 정치외교학 지리학 행정학 경제학 무역학 인류학 기타 사회과학
자연과학
자연과학 일반 물리학 생물학 생활과학 수학·통계학 천문학 지구과학 화학 기타 자연과학
공학
공학 일반 건축공학 기계공학 산업공학 재료·에너지공학 전기전자공학 조선해양공학 화학공학 컴퓨터학 기타공학
의약학
의학 일반 간호학 수의학 약학 한의학 기초의학 임상의학 기타 의약학
농수해양학
농수해양학 일반 농학 수산학 식품과학 임학 축산학 해상운송학 기타 농수해양학
예술체육학
예술 일반 디자인 미술 미용 사진 음악학 의상 체육 공연매체예술 기타 예술체육학
복합학
학제간연구 과학기술학 뇌인지과학 기술정책 기타 복합학

ENG

추천
검색

논문 기본 정보

자료유형
학술저널
저자정보
저널정보
한국미생물생명공학회 Journal of Microbiology and Biotechnology Journal of Microbiology and Biotechnology 제24권 제2호
발행연도
2014.1
수록면
144 - 151 (8page)

이용수

표지
📌
연구주제
📖
연구배경
🔬
연구방법
🏆
연구결과
AI에게 요청하기
추천
검색

초록· 키워드

오류제보하기
Increasing the gene copy number has been commonly used to enhance the protein expressionlevel in the yeast Pichia pastoris. However, this method has been shown to be effective up to acertain gene copy number, and a further increase of gene dosage can result in a decrease ofexpression level. Evidences indicate the gene dosage effect is product-dependent, which needsto be determined when expressing a new protein. Here, we describe a direct detection of thegene dosage effect on protein secretion through expressing the enhanced green fluorescentprotein (EGFP) gene under the direction of the α-factor preprosequence in a panel of yeastclones carrying increasing copies of the EGFP gene (from one to six copies). Directly examinedunder fluorescence microscopy, we found relatively lower levels of EGFP were secreted intothe culture medium at one copy and two copies, substantial improvement of secretionappeared at three copies, plateau happened at four and five copies, and an apparent decreaseof secretion happened at six copies. The secretion of EGFP being limiting at four and fivecopies was due to abundant intracellular accumulation of proteins, observed from thefluorescence image of yeast and confirmed by western blotting, which significantly activatedthe unfolded protein response indicated by the up-regulation of the BiP (the KAR2 geneproduct) and the protein disulfide isomerase. This study implies that tagging a reporter likeGFP to a specific protein would facilitate a direct and rapid determination of the optimal genecopy number for high-yield expression.
#Copy number #EGFP #qPCR #Pichia pastoris

목차

등록된 정보가 없습니다.

참고문헌 (17)

참고문헌 신청
Athmaram TN / 2012 / Influence of copy number on the expression levels of pandemic influenza hemagglutinin recombinant protein in methylotrophic yeast Pichia pastoris / Virus google schola Burak E / 2013 / Evolving dual targeting of a prokaryotic protein in yeast / Mol. Biol. Evol 30 : 1563 ~ 1573 google schola Cregg JM / 2000 / Recombinant protein expression in Pichia pastoris / Mol. Biotechnol 16 : 23 ~ 52 google schola Daly R / 2005 / Expression of heterologous proteins in Pichia pastoris: a useful experimental tool in protein engineering and production / J. Mol. Recognit 18 : 119 ~ 138 google schola Hohenblum H / 2004 / Effects of gene dosage, promoters, and substrates on unfolded protein stress of recombinant Pichia pastoris / Biotechnol. Bioeng 85 : 367 ~ 375 google schola

이 논문의 저자 정보

최근 본 자료

전체보기

댓글(0)

0