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논문 기본 정보

자료유형
학술저널
저자정보
저널정보
한국미생물생명공학회 Journal of Microbiology and Biotechnology Journal of Microbiology and Biotechnology 제24권 제3호
발행연도
2014.1
수록면
408 - 420 (13page)

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Yeast surface-displayed antibody libraries provide an efficient and quantitative screeningresource for given antigens, but suffer from typically modest library sizes owing to low yeasttransformation efficiency. Yeast mating is an attractive method for overcoming the limit ofyeast transformation to construct a large, combinatorial antibody library, but the optimalconditions have not been reported. Here, we report a large synthetic human Fab (antigenbinding fragment) yeast surface-displayed library generated by stepwise optimization of yeastmating conditions. We first constructed HC (heavy chain) and LC (light chain) libraries, whereall of the six CDRs (complementarity-determining regions) of the variable domains werediversified mimicking the human germline antibody repertoires by degenerate codons, ontosingle frameworks of VH3-23 and Vκ1-16 germline sequences, in two haploid cells of oppositemating types. Yeast mating conditions were optimized in the order of cell density, media pH,and cell growth phase, yielding a mating efficiency of ~58% between the two haploid cellscarrying HC and LC libraries. We constructed two combinatorial Fab libraries with CDR-H3 of9 or 11 residues in length with colony diversities of more than 109 by one round of yeastmating between the two haploid HC and LC libraries, with modest diversity sizes of ~107. Thesynthetic human Fab yeast-displayed libraries exhibited relative amino acid compositions ineach position of the six CDRs that were very similar to those of the designed repertoires,suggesting that they are a promising source for human Fab antibody screening.
#Human Fab library #germline repertoires #yeast surface display #yeast mating

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참고문헌 (24)

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Benatuil L / 2010 / An improved yeast transformation method for the generation of very large human antibody libraries / Protein Eng. Des. Sel 23 : 155 ~ 159 google schola Blaise L / 2004 / Construction and diversification of yeast cell surface displayed libraries by yeast mating : application to the affinity maturation of Fab antibody fragment google schola Boder ET / 1997 / Yeast surface display for screening combinatorial polypeptide libraries / Nat. Biotechnol 15 : 553 ~ 557 google schola Cappellaro C / 1994 / Mating type-specific cell-cell recognition of Saccharomyces cerevisiae: cell wall attachment and active sites of a- and alpha-agglutinin / EMBO J 13 : 4 google schola Chao G / 2006 / Isolating and engineering human antibodies using yeast surface display / Nat. Protoc 1 : 755 ~ 768 google schola

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