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논문 기본 정보

자료유형
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저자정보
저널정보
한국미생물생명공학회 Journal of Microbiology and Biotechnology Journal of Microbiology and Biotechnology 제20권 제12호
발행연도
2010.1
수록면
1,689 - 1,695 (7page)

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Pantothenate kinase (PanK) catalyzes the first step in the biosynthesis of the essential and ubiquitous cofactor coenzyme A (CoA) in all organisms. Here, we report the identification, cloning, and characterization of panK-sp from Streptomyces peucetius ATCC 27952. The gene encoded a protein of 332 amino acids with a calculated molecular mass of 36.8 kDa and high homology with PanK from S. avermitilis and S. coelicolor A3(2). To elucidate the putative function of PanK-sp, it was cloned into pET32a(+) to construct pPKSP32, and the PanK-sp was then expressed in E. coli BL21(DE3) as a His-tag fusion protein and purified by immobilized metal affinity chromatography. The enzyme assay of PanK-sp was carried out as a coupling assay. The gradual decrease in NADH concentration with time clearly indicated the phosphorylating activity of PanK-sp. Furthermore, the ca. 1.4-fold increase of DXR and the ca. 1.5-fold increase of actinorhodin by in vivo overexpression of panK-sp,constructed in pIBR25 under the control of a strong ermE* promoter, established its positive role in secondary metabolite production from S. peucetius and S. coelicolor,respectively.
#Coenzyme-A #pantothenate kinase #coupling assay #Streptomyces peucetius #Streptomyces coelicolor #Streptomyces clavuligerus

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Altschul, S. F / 1990 / Basic local alignment search tool / J. Mol. Biol 215 : 403 ~ 410 google schola Begley, T. P / 2001 / The biosynthesis of coenzyme A in bacteria / Vitam. Horm 61 : 157 ~ 171 google schola Bird, A. E / 1982 / Spectrophotometric assay of clavulanic acid by reaction with imidazole / Analyst 104 : 1241 ~ 1245 google schola Bradford, M. M / 1976 / A rapid and sensitive method for the quantification of microgram quantities of protein utilizing the principle of protein-dye binding / Anal. Biochem google schola Brand, L. A / 2005 / Characterization of a new pantothenate kinase isoform from Helicobacter pylori / J. Biol. Chem 280 : 20185 ~ 20188 google schola

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