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논문 기본 정보
- 자료유형
- 학술저널
- 저자정보
- 발행연도
- 2012.1
- 수록면
- 348 - 355 (8page)
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본 연구에서는 S. cerevisiae와 P. pastoris에서 bovine pancreatic (bp-) DNase I의 과발현과 재조합 DNase I의 특성을 조사하였다. bp-DNase I 유전자는 GAL10 promoter, MFα, GAL7 terminator 사이에 삽입하여 재조합 plasmid인pGAL-MFα-DNaseI (6.4 kb)를 구축하였다. 그리고 bp-DNase I 유전자를 AOX1 promoter, MFα, AOX1 terminator 에 삽입하여 재조합 plasmid인 pPEXI (8.8 kb)를 구축하였다. 재조합 plasmid인 pGAL-MFα-DNaseI과 pPEXI를 각각 S. cerevisiae와 P. pastoris 숙주세포에 형질전환시켰다.
형질전환된 효모세포들을 galactose와 methanol 배지에서30oC, 48시간 배양하면 bp-DNase I은 대부분이 배양 상등액으로 과발현되었다. P. pastoris 형질전환체는 배양 상등액에서 45.5 unit/mL의 DNase I 활성을 보였으며, 반면에 S. cerevisiae 형질전환체는 37.7 unit/mL의 DNase I 활성을 보였다. 또한 DNA 분해 특성을 조사한 결과, P. pastoris 재조합 DNase I으로 기질 DNA(calf thymus)를 처리하였을 때1분 이내 DNA가 분해되는 것을 확인할 수 있었으며 이는상업용 bp-DNase I과 S. cerevisiae 재조합 DNase I으로 처리했을 때보다 빠른 분해 패턴을 보였다.
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참고문헌 (23)
참고문헌 신청
Bernardi, G / 1971 / Spleen acid deoxyribonuclease, In The Enzymes : 271 ~ 287
Broker, M / 1991 / Expression of the human blood coagulation protein factor XIIIa in Saccharomyces cerevisiae: Dependence of the expression levels from host-vector system and
Castanon, M. J / 1988 / Cloning of human lysozyme gene and expression in the yeast Saccharomyces cerevisiae / Gene 66 : 223 ~ 234
Chen, C. Y / 1998 / Cloning, sequencing and expression of a cDNA encoding bovine pancreatic deoxyribonuclease I in Escherichia coli: purification and characterization of the
Chung, B. H / 1995 / Effect of galactose feeding strategy on heterologous human lipocortin-I production in the fed-batch culture of Saccharomyces cerevisiae controlled by the
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