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저자정보
저널정보
한국미생물생명공학회 Journal of Microbiology and Biotechnology Journal of Microbiology and Biotechnology 제14권 제4호
발행연도
2004.1
수록면
789 - 795 (7page)

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A promoter-probe shuttle vector pSK1Cat wasconstructed for the isolation of transcriptional signal sequencesfrom Corynebacterium glutamicum. Besides conferring resistanceto kanamycin in Escherichia coli and C. glutamicum, thevector carried a promoterless cat gene to confer resistance tochloramphenicol upon insertion of the appropriate transcriptionalsignals in the multiple cloning site. By utilizing the vector, aseries of transcriptionally active fragments were isolated fromthe genome of C. glutamicum. The clones, ranging from200 bp to 1 kb in size, were grouped into 3 classes of strong,medium, and weak, based on the chloramphenicol acetyltransferase(CAT) activity and sensitivity to the chloramphenicol ofthe clone-carrying C. glutamicum cells. C. glutamicum cellscarrying the P19 clone, a representative in the strong class,were able to grow on minimal agar plates containing over40 mg/ml chloramphenicol, and showed CAT activity of10 mmol/mg·min, performing slightly better than the cellscarrying Ptac, a strong E. coli promoter. Subcloning analysis ofthe P19 clone identified a 180 bp intergenic fragment (P180),which was located upstream of a gene encoding a hypotheticalmembrane protein. The expression conferred by P180 was notaffected by either the kinds of carbon sources or changes intemperature. These properties make the P180 clone useful forthe deregulated expression of biosynthetic genes in C.glutamicum during amino acid fermentation.
#Corynebacterium glutamicum #promoter #promoter-probe vector #tac

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