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β-1,3-glucanase는 다양한 바이오공정에 널리 사용되어지는 효소로서 산업적 이용가치 증대를 위해 β-1,3-glucanase의 대량생산이 요구되어 지고 있다. 본 연구에서는 반복서열 δ-sequence에 의한 integration를 통해 Aspergillus oryzae유래의 β-1,3-glucanase (EXGA)의 과발현 유도를 연구하였다. 먼저 효모내의 여러 염색체상에 EXGA 유전자를 integration하기 위해 pRSδ-exgA와 pRSδK-exgA 플라스미드를 구축하였다. 이 플라스미드는 유전자의 구성적 발현을 위한 ADH1 프로모터, 분비생산을 위한 signal sequence와 β-1,3-glucanase유전자의 integration을 위한 δ-sequence를 포함하고 있다. 먼저 pRSδ-exgA 플라스미드를 BY4742△exg1 균주에 형질전환하고, 재조합 β-1.3-glucanase가 안정하게 과발현 및 분비생산됨을 확인하였다. 다음으로 geneticin 선별을 통한 integration유도와 β-1,3-glucanase 활성과의 관계를 조사해보기 위해 pRSδK-exgA 플라스미드를 BY4742△exg1(YKY082) 균주에 도입한 결과, geneticin 농도 증가에 따라 β-1,3-glucanase 활성도 증가되었고, geneticin 농도 0.8 ㎎/ml가 β-1,3-glucanase과발현에 적합한 농도임을 확인 할 수 있었다. 이어서 pRSδK-exgA 플라스미드는 연속적 δ-integration에 의해 효모세포 내에 도입되어, 한번, 두번, 세번 그리고 네번의 integration에 의해 β-1,3-glucanase의 비활성은 0.063, 0.095, 0.131 그리고 0.165 unit/ml/OD600로 증가되었다. 또한 연속적 integration에 의해 β-1,3-glucanase의 활성이 증가됨에 따라 다양한 염색체에 도입된 EXGA 유전자의 복제수(integration 빈도)도 같이 증가되었음을 확인하였다. 따라서 본 연구 결과는 반복적 δ-sequence integration방법을 통해 재조합 β-1,3-glucanase의 활성을 점진적으로 안정하게 증가시킬 수 있음을 제시하였다.
목차
서론
재료 및 방법
결과 및 고찰
References
초록
참고문헌 (35)
참고문헌 신청
1. [학술지(정기간행물)] - Bara, M. T. F. / 2003 / Purification and characterization of an exo-β-1, 3-glucanase produced by Trichoderma asperellum / FEMS Microbiol Lett 219 : 81 ~ 85
2. [학술지(정기간행물)] - Broach, J. R / 1983 / Construction of high copy yeast vectors using 2-μm circle sequences / Methods Enzymol 101 : 307 ~ 325
3. [단행본] - Burke, D. / 2000 / A Cold Spring Harbor Laboratory Course Manual / A Cold Spring Harbor Laboratory : 110 ~ 111
4. [학술지(정기간행물)] - Cho, K. M. / 1999 / δ-integration of endo : exo-glucanase and β-glucosidase genes into the yeast chromosomes for direct conversion of cellulose to ethanol / Enzyme Microb Technol 25 : 23 ~ 30
5. [학술지(정기간행물)] - Dujon, B / 1996 / The yeast genome project: what did we learn? / Trends Genet 12 : 263 ~ 270
2. [학술지(정기간행물)] - Broach, J. R / 1983 / Construction of high copy yeast vectors using 2-μm circle sequences / Methods Enzymol 101 : 307 ~ 325
3. [단행본] - Burke, D. / 2000 / A Cold Spring Harbor Laboratory Course Manual / A Cold Spring Harbor Laboratory : 110 ~ 111
4. [학술지(정기간행물)] - Cho, K. M. / 1999 / δ-integration of endo : exo-glucanase and β-glucosidase genes into the yeast chromosomes for direct conversion of cellulose to ethanol / Enzyme Microb Technol 25 : 23 ~ 30
5. [학술지(정기간행물)] - Dujon, B / 1996 / The yeast genome project: what did we learn? / Trends Genet 12 : 263 ~ 270
이 논문의 저자 정보
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