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사스(Severe acute respiratory syndrome, SARS)는 사람의 신종 폐렴인 중증 급성 호흡기 질환으로 신종 코로나바이러스, SARS-CoV에 의해 유발된다. 3CL protease는 SARS-CoV의 복제, 전사 및 단백질 합성을 조절하는 복제효소 복합단백질의 프로세싱에 결정적인 역할을 담당하는 중요한 효소이다. 따라서, 이 효소를 저해함으로써 SARS-CoV의 증식을 억제하고 사스의 증폭 및 확산을 막을 수 있다. SARS-3CL protease의 활성 저해물질의 탐색은 사스의 치료제 개발에 중요한 목표 중의 하나로 인식되고 있으며 이를 위해서는 활성형 SARS-3CL protease의 대량 생산이 필요하다. 본 연구에서는 활성형 SARS-3CL protease를 대량 생산하기 위하여 여러 가지 발현 벡터 및 단백질 발현 방법 등을 검토하였다. 그 결과, pET29a/3CLP 발현 벡터를 이용한 무세포 단백질 합성법이 SARS-3CL protease 생산에 최적 조건인 것으로 확인되었다. 또한 발현된 효소를 완전히 정제하여 그 특성을 분석한 결과, 본 효소는 무세포 단백질 합성계에서 전구체로 합성됨과 동시에 자가분해됨으로써 모든 단백질이 활성형인 성숙체 단백질로 전환되어 간단히 활성형 SARS-3CL protease 효소를 생산할 수 있음을 확인하였다.
목차
서론
재료 및 방법
결과 및 고찰
감사의 글
References
초록
참고문헌 (25)
참고문헌 신청
1. [학술지(정기간행물)] - Anand, K. / 2003 / Coronavirus main proteinase (3CLpro) structure: basis for design of anti-SARS drugs / Science 300 : 1763 ~ 1767
2. [학술지(정기간행물)] - Blanchard, J. E. / 2004 / High-throughput screening identifies inhibitors of the SARS coronavirus main proteinase / Chem. Biol 11 : 1445 ~ 1453
3. [학술지(정기간행물)] - Chou, K. C. / 2003 / Binding mechanism of coronavirus main proteinase with ligands and its implication to drug design against SARS / Biochem. Biophys. Res. Commun 308 : 148 ~ 151
4. [학술지(정기간행물)] - Donnelly, C. A. / 2003 / Epidemiological determinants of spread of causal agent of severe acute respiratory syndrome in Hong Kong / Lancet 361 : 1761 ~ 1766
5. [학술지(정기간행물)] - Drosten, C. / 2003 / Identification of a novel coronavirus in patients with severe acute respiratory syndrome / N. Engl. J. Med 348 : 1967 ~ 1976
2. [학술지(정기간행물)] - Blanchard, J. E. / 2004 / High-throughput screening identifies inhibitors of the SARS coronavirus main proteinase / Chem. Biol 11 : 1445 ~ 1453
3. [학술지(정기간행물)] - Chou, K. C. / 2003 / Binding mechanism of coronavirus main proteinase with ligands and its implication to drug design against SARS / Biochem. Biophys. Res. Commun 308 : 148 ~ 151
4. [학술지(정기간행물)] - Donnelly, C. A. / 2003 / Epidemiological determinants of spread of causal agent of severe acute respiratory syndrome in Hong Kong / Lancet 361 : 1761 ~ 1766
5. [학술지(정기간행물)] - Drosten, C. / 2003 / Identification of a novel coronavirus in patients with severe acute respiratory syndrome / N. Engl. J. Med 348 : 1967 ~ 1976
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