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논문 기본 정보

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저널정보
한국생명과학회 생명과학회지 생명과학회지 제19권 제8호
발행연도
2009.8
수록면
1,039 - 1,046 (8page)

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다양한 천연물의 합성대사에 관여하는 식물 cytochrome P450 (P450s)은 그 기능적 다양성에도 불구하고, 이들 효소의 광범위한 기질 특이성을 설명해 줄 수 있는 구조분석에 대해서는 충분한 연구가 이루어지지 못하고 있는 실정이다. 식물 p-coumarate 3-hydroxylase (C3H)에 의해 매개되는 효소 반응은 lignin 과 다양한 phenylpropanoid 부산물들의 생합성에 매우 중요한 것으로 여겨지지만, 막 단백질인 C3H의 발현 및 정제가 효과적으로 이루어지지 못하여, 활성을 측정하기 위한 분석방법이 체계화 되지 못하고 있다. C3H의 작용기작과 기질특이성에 대해 폭넓은 이해를 위한 구조분석의 선행단계는 활성을 갖는 C3H를 밀리그램 단위로 분리, 정제하는 실험적 방법을 확립하는 것이라 할 수 있다. 이를 위해, 본 연구에서는 다양한 돌연변이 방법을 도입하여 식물 막단백질 C3H를 대장균 시스템에서 효과적으로 발현 및 정제할 수 있는 시스템을 사용하였다. 변형된 cytochrome P450 C3H (C3Hmod)을 세포막으로부터 고농도의 염완충용액을 이용하여 계면활성제 없이 추출하였으며, 2단계 chromatography를 통해 활성을 유지한 상태로 분리할 수 있었다. 이러한 실험적 기법은 NMR 및 X-ray crystallography와 같은 구조분석을 통한 C3H의 효과적인 분석에 적용될 수 있을 것이며, 또한 다른 식물 cytochrome P450 단백질의 효과적인 분석에도 적용 될 수 있을 것이다.
#Cytochrome P450s #C3H #phenylpropanoid #bacterial expression #mutagenesis

목차

Introduction
Materials and Methods
Results
Discussion
Acknowledgment
References
초록

참고문헌 (29)

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1. [학술지(정기간행물)] - Alibert, G. / 1972 / Studies on enzymes catalyzing phenolic acids formation in Quercus penduculata (Ehrh.). II. Intracellular location of phenylalanine ammonia-lyase, cinnamate 4-hydroxylase and “benzoate synthase” / Biochim. Biophys. Acta. 279 : 282 ~ 289 google schola 2. [학술지(정기간행물)] - Chapple,C / 1998 / Molecular-genetic analysis of plant cytochrome P450-dependent monooxygenase / Annu. Rev. Plant Physiol. Plant Mol. Biol. 49 : 311 ~ 343 google schola 3. [학술지(정기간행물)] - Davin, L. B. / 2008 / Dissection of lignin macromolecular configuration and assembly: comparison to related biochemical processes in allyl/propenyl phenol and lignan biosynthesis / Nat. Prod Rep. 25 : 1015 ~ 1090 google schola 4. [학술지(정기간행물)] - Dick, R. A. / 2004 / The catalytic and kinetic mechanisms of NADPH-dependent alkenal/one oxidoreductase / J. Biol. Chem. 279 : 17269 ~ 17277 google schola 5. [학술지(정기간행물)] - Ford, J. D. / 1999 / Plant lignans and health: cancer chemoprevention and biotechnological opportunities / Basic Life Sci. 66 : 675 ~ 694 google schola

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