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논문 기본 정보
- 자료유형
- 학술저널
- 저자정보
- 발행연도
- 1994.9
- 수록면
- 228 - 234 (7page)
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Tobamovirus의 하나인 오돈토글로썸 윤문 바이러스 Cy계통(ORSV-Cy)을 Samsun 담배에서 증식 순화하여 이로부터 바이러스 RNA를 추출하였다. 순화된 바이러스 입자로부터 분리된 ORSV-Cy 게놈 RNA는 약 6.6Kb였다. 게놈 RNA를 Sephadex G-50 크로마토그래피에 통과시킨 후 이를 대장균에서 분리된 poly(A) polymerase를 사용하여 3’ 말단에 poly(A) tail을 합성하였다. Poly(A) tail시킨 바이러스 RNA는 oligo(dT) 셀룰로오스 컬럼 크로마토그래피 법으로 정제하였고, 이를 cDNA 합성시 주형으로 사용하였다. 첫번째 가닥 cDNA 합성은 poly(A) tail된 RNA, NotI 제한효소 부위를 포함하는 oligo(dT) primer와 RNase H가 결여된 Mononey murine virus superscript 역전사 효소를 사용하였다. 두번째 가닥 cDNA는 대장균 DNA ligase, 대장균 RNase H 및 대 장균 DNA polymerase Ⅰ을 사용하여 nick translation에 의해 합성하였다. 합성된 ORSV-Cy RNA에 대한 cDNA를 포함한 재조합 플라스미드는 800~3,000 염기 크기 범위였다. 선발된 총 238개 재조합 클론 중에서 바이러스 RNA 3’ 말단을 포함하는 pORY-124 클론이 가장 길었다. 이 클론은 EcoRi 및 XbaⅠ에 대한 인식부위가 2개씩 존재하였고, AcccⅠ, AvaⅠ, BglⅡ, Bst?, HindⅢ, PstⅠ 및 TthⅢ 1 인식부위가 각각 1개씩 존재하였다. 이 클론은 제한지도 및 염기서열결과를 토대로 할 때 바이러스 복제효소의 일부분과 전체크기의 이동단백질 및 외피 단백질 그리고 3’ 말단의 414 염기로된 비번역부위를 포함하였다. pORCY-028, -068, -072, -187 및 -224 클론들은 -124 클론과 중복되는 부분이 존재하였다. pORCY-014 및 -095 클론은 제한효소 및 염기서열 분석결과를 토대로 하여 바이러스 RNA 중심으로부터 5’ 말단 방향을 포함하였다. 구축된 cDNA 유전자원 클론들은 본 바이러스 게놈 크기에 대해 90% 이상을 포함하였다.
목차
ABSTRACT
MATERIALS AND METHODS
RESULTS
DISCUSSION
요약
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