담배 모자이크 바이러스의 고추계(TMV-P)와 보통계(TMV-OM), 감자 Y 바이러스(PVY), 순무 모자이크 바이러스(TuMV), 오이 모자이크 바이러스(CMV) 및 감자 잎말림 바이러스(PLRV)등 6종의 식물 RNA바이러스를 공시하여 각 게놈 RNA의 외피단백질유전자(coat protein gene, CP 유전자)에 대응하는 cDNA를 in vitro 전사 벡터 pSPT18에 서브클로닝 시켰다. 각 바이러스의 클론들로부터 추출한 플라스미드를 이용하여 digoxigenin(DIG) 표지 RNA probe를 합성하고, 이들 probe의 민감성을 검정하기 위하여 각 바이러스 RNA의 단계별 희석액과 slot-blot 분자교잡을 실시한 결과, TMV-P, TMV-OM에서는 10?⁴, TuMV, CMV 및 PVY는 10?³, 그리고 PLRV는 10?² 희석의 검출한계를 나타냈다. 각 바이러스의 이병식물로부터 잎디스크(직경 8㎜, 무게 12~15㎎)를 제작하여 실시한 분자 교잡에서는 TMV-P, TMV-OM 및 TuMV에서는 1매, PVY는 1~2매, CMV는 2매, PLRV는 3매의 디스크로 부터 각 바이러스를 검출할 수 있었다. PVY를 접종한 후 바이러스가 최초로 검출되는 시기를 검정한 결과 DIG-RNA probe에 의해서는 접종 5일째부터 바이러스의 검출이 되었으나, ELISA에 의해서는 8일째의 시료에서 가능하였고, 병징은 9일째부터 발현되었다. TMV-P와 OM의 CP 유전자의 DIG-RNA probe를 교차로 이용한 계통간 분자교잡반응의 차이는 구분되지 않았다.
The cDNAs derived from the coat protein (CP) genes of six plant RNA viruses, tobacco mosaic virus-pepper strain (TMV-P) and -ordinary strain (TMV-OM), potato virus Y (PVY), turnip mosaic virus (TuMV), cucumber mosaic virus (CMV) and potato leafroll virus (PLRV), were subcloned into the transcription vector, pSPT18, containing SP6 and T7 promoters. The digoxigenin (DIG)-labeled RNA probes of all clones were synthesized by in vitro transcription with SP6 or T7 RNA polymerase after linearization of the cloned pSPTs with XbaI or SacI, and were tested for their sensitivities for the detection of the six viruses. In slot-blot hybridization, dilution end points for the detection of TMV-P and TMV-OM were 10?⁴, while those of PVY, TuMV and CMV were 10?³. PLRV was detected at the dilution of 10?². When each RNA probe was applied for the detection of the viruses in the preparations from the leaf disks (8㎜ in diameter, and 12 to 15㎎ in weight) of infected natural host plants, TMV-P, TMV-OM and TuMV could be detected from one disk, while PVY from 1 or 2 disks. CMV was detected in the preparation from two disks, and PLRV from three disks. With DIG-labeled RNA probe, PVY was detected at 5 days after inoculation, but with ELISA the virus was detected at 8 days after inoculation to tobacco (Nicotiana tabacum cv. Xanthi nc) plants on which symptoms appeared at 9 days after inoculation. No difference was observed in cross reaction between the RNA probes for the detection of TMV-P and TMV-OM.