간추림 지라는 연령 뿐만 아니라 영양, 면역독성, 스트레스, 감염 및 종양 등의 질병상태에 따라 민강하게 반응 한다고 알려져 있다. 이 실험은 암의 치료목적에 사용되는 항암재 중 대사걸항제인 5-fluorouracil (5-FU)과 항암항생제인 mitomycin C 를 택하여 이들 약품이 지라조직에 미치는 영향을 형태적으로 연구하기 위하여 시행하였다.
실험동물은 체중 25~30 gm의 ICR 생쥐를 사용하였으며, 실험군에 따라 mitomycin C (400 ㎛/kg) 또는 5- fluorouracil (60 mg/kg) 을 격일간격으로 피부밑조직에 주사한 후, 7 일과 14일째에 희생시켰다. 정상대조군과 실험군에서 떼어낸 지라조직은 광학현미경관찰용은 10% 중성 formalin 으로 고정한 후, 일반적인 조직구조를 관찰하기 위하여는 hematoxylin-eosin 염색법을, 조직내 아교섬유의 변화를 관찰하기 위하여는 Masson -trichrome 염색법을, 조직내 세망섬유의 변화를 관찰하기 위하여는 Bielschowsky 도은법을, 탄력섬유의 변화를 관찰하기 위하여는 aldehyd efuchsin 염색법을 시행하였다. 한편 전자현미경관찰용은 2.5% glutaraldehyde-1.5% parafor
maldehyde 혼합액 (Millonig’s phosphate buffer, pH 7.3) 에 고정한 후, 1% osmium tetroxide 액 (Millonig’s phosphate buffer, pH 7.3) 에 다시 고정하였으며 고정이 끝난 조직을 탈수과정을 거쳐 araldite 혼합액에 포매하였다. 포매된 조직은 lμm 두께의 절편을 만든 후, toluidine blue 로 염색하여 지라조직의 백색속질과 그 주변의 적색속정 부 위를 택하여 60-70nm 두께의 앓은 절편을 만들었다. 각 절편은 uranyl acetate 액과 lead citrate 액으로 대조염색 한 후, JEM l00CX-II 전자현미경으로 비교 관찰하였으며, 다음과 같은 결과를 얻었다.
1 광학현미경관찰의 경우, mitomycin C투여군이 5-FU 투여군에 비하여 백색속질에서 농축핵을 포함하고 있는 공포모양의 큰포식세포들이 더 많이 관찰되었다.
2. 5-FU 투여군과 mitomycin C 투여군 모두 Masson-trichrome 염색과 Bielschowsky 도은법에서는 2주일문의
피막과 잔기둥에서 강한 양성반응을 보였으나, 2주일군에서는 약한 양성반응을 보였다.
3. Aldehyde-fuchsin 염색의 경우 5-FU 투여군과 mitomycin C 투여군에서 모두 피막과 잔기둥 및 중심동맥
주위에 강한 양성반응을 보였고, 2 주일군은 l 주일군과 유사한 소견을 보였다.
4. 전자현미경판창의 경우 성유왜포의 파립세포질세망의 수조가 확장된 세포들이 mitomycin C 투여 1 주일
군에서 자주 관찰되었다.
5. 전자현미경 관찰의 경우 실험군이 정상대조군에 비하여 림프구와 세망세포에서 수초구조가 많이 관찰되었는데, 특히 mitomycin C 투여군의 경우가 5-FU 투여군에 비하여 더 많이 관찰되었다.
이상의 결과를 종합해 보면 mitomycin C 와 5-FU 흥 수회 투여하는 정도로는 지라조직을 구성하는 림프구와 세망세포에 생각한 손상을 주지는 않으나, 두 가지 약품가운데는 mitomycin C 가 5-FU 에 비하여 지라조직에 좀 더 손상을 주었다고 생각된다.
This experiment was performed to evaluate the morphological responses of 5-fluorouracil or mitomycin C on the spleen of the mice. 5-fluorouracil (60 mg/kg) or mitomycin C (400 ㎍/kg) were injected subcutaneously every other day, and the animals were sacrificed at I week and 2 weeks following the first injection.
Pieces of the tissue were taken from the spleen, fixed in 10% neutral fonnalin for light microscopy. The paraffin sections stained with hematoxylin-eosin. Masson-trichrome, Bielschowsky's silver impregnation or aldehyde-fuchsin. For electron microscopy, the tissues were prefixed with 2.5% glutaraldehyde-1.5% paraformaldehyde followed by post-fixed with 1 % osmium tetroxide. The ultrathin sections stained with uranyl acetate and lead citrate.
The observed results were as follows:
1. On histological study, in the mitomycin C treated group, macrophages which contain pyknotic nuclei were
observed more frequently than in those of 5-fluorouracil treated group.
2. In the 5-fluorouracil treated group, positive reactions to Masson-trichrome and Bielschowsky's silver impregnation were observed in the splenic capsule and traculae at the I week, and weak postive stains were observed at the 2 weeks.
3. In the mitomycin C and the 5-fluorouracil group, positive staining reaction to aldehyde-fuchsin were observed in
splenic capsule, trabeculae and around artery at the I week and 2 weeks.
4. On the ultrastructural study, distended cisternae of granular endoplasmic reticula were observed frequently at I
week.
5. In the mitomycin C treated group, myelin figures in the lymphocytes and reticular cells were observed more
frequently than in those of S-fluorouracil treated group. .
From the above results, it was concluded that lymphocytes and reticular cells of the spleen were slightly damaged by
S-fluorouracil or mitomycin C, and mitomycin C seems more harmful on the spleen than 5-fluorouracil does.